研究課題
SPARCは，マトリセルラープロテインである．これまでにマウスの3系統のSPARCのノックアウト(KO)マウス肺に共通して発現が上昇している遺伝子として，CAMP，NGP，SAA3を同定していたので，今年度はCRISPER/Cas9システムによるゲノム編集によりB16BL6メラノーマ細胞からSPARC遺伝子をKOした細胞を作製し，その効果の普遍性を検討した．その結果，KOマウスの肺同様にCAMP，NGP，SAA3遺伝子の発現上昇が確認され，さらにMMP3やMMP9発現も上昇することも見出された．これらの遺伝子発現には，AP-1の関与が重要なので，構成因子であるc-Fosやc-Junの発現を調べてみると，SPARC KO細胞では，ホルボルエステル刺激でc-Fosやc-Jun発現が顕著に上昇することを見出した．さらに別の系として骨髄ストローマ細胞であるST2細胞を用いて，SPARCをKOするとホルボルエステル刺激でAP-1活性が上昇することが見出された．一方，SPARCは分泌蛋白質であるが，細胞内で作用している可能性を考え，SPARCをKOしたB16-BL6細胞にシグナル配列の異なるSPARC発現ベクター構築し，安定細胞株を得た．すなわち，シグナル配列を欠失したSPARC delta signal vector，トリプシノーゲンのシグナル配列に置換した SPARC PPT-signal vector，ワイルドタイプのシグナル配列を有したSPARC WT-signal vectorである．その結果，SPARC PPT-signalベクター導入株とSPARC WT-signalベクター導入株で細胞内局在が酷似していた．このことは，SPARCの細胞内作用を強く示唆するものである．従って，SPARCは，AP-1の活性を制御する細胞内因子であることが示唆された．
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すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件、 オープンアクセス 4件、 謝辞記載あり 3件) 学会発表 (6件)
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