| 研究課題/領域番号 |
24680091
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| 研究機関 | 福井大学 |
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研究代表者 |
青木 耕史 福井大学, 医学部, 教授 (40402862)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 大腸癌 / 細胞増殖 / 細胞死 / 活性酸素 |
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| 研究概要 |
これまでの解析から腸管上皮細胞に特異的に発現するホメオボックス転写因子CDX2が大腸腫瘍形成の発生初期段階を抑制することや、その機序としてCDX2が大腸癌細胞の細胞周期や細胞生存を負に制御することを明らかにした。そこで、H24年度に行ったcDNAマイクロアレイ解析の結果をさらにreal-time PCRなどを用いて発現の確認を行うとともに、CDX2の発現を誘導できるtransgenic mouse作成用のplasmid vectorの作成を行った。これらの解析から次のことが分かった。
1)CDX2の転写活性依存性に発現を抑制している遺伝子群には、活性酸素量を調節し、かつ癌の進行において重要な役割を担うと考えられている遺伝子が複数個、含まれていた。real-time PCRによる解析によっても実際に、その発現量が強く制御されていることが分かった。
2)また、CDX2によって活性化するオートファジーによって活性酸素の量が増加することがわかった。
3)TetOn-Transgenic動物を作成するためのplasmid vectorをH24年度に作成したが、H24年度に作成したplasmid vectorには、不具合があることが分かったため、H25年度に新たに作成し直した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
また、H24年度に行ったcDNAマイクロアレイ解析の結果の再現性が得られたことも良かったが、CDX2の標的遺伝子の機能解析に至っていないのでやや遅れている。また、オートファジの活性化により活性酸素量が増加することがわかったことは実験が進捗した。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成26年度は、平成25年度の遺伝子発現解析から抽出した遺伝子の機能解析を行うと同時に、CDX2が直接に発現を制御しているかを解析するためにChIP-sequenceを用いた解析を行う。また、CDX2のTetOn-Transgenic動物の作成を進める。
H25-実験1) Tet-inducibleシステムを用いて候補の因子の発現を誘導し、大腸癌細胞の増殖や生存に与える影響をしらべる。また、細胞周期に与える影響を調べる。
H25-実験2) flag-CDX2の発現をTet-inducible systemを用いて誘導し、anti-flag抗体を用いてChIP-sequenceを行い、CDX2が直接に制御しているゲノム領域の特定を行う。
H25-実験3) CDX2の発現を誘導できるTransgenicマウスの作成を進めるために、ES細胞にtargeting vectorの導入を行う。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
H25年度に計画したTransgenic動物の作成がH26年度に遅れたため。
H25年度に計画したTransgenic動物の作成をH26年度に実施する。
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