| 研究課題/領域番号 |
24689057
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| 研究種目 |
若手研究(A)
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
味八木 茂 広島大学, 大学病院, 講師 (10392490)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 関節病態 / 変形性関節症 / 軟骨 / マイクロRNA |
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| 研究概要 |
初年度は、1.関節構成細胞における分泌miRNAsを含むエクソソームの関節内機能を解明と2.OA由来細胞より分泌する分泌miRNAのプロファイル解析を行った。1.(1)変形性関節症(OA)様滑膜細胞におけるエクソソームは、正常細胞に比べてその分泌数を増加させ、軟骨細胞におけるOA関連遺伝子の発現を増加および軟骨基質遺伝子の発現を減少させた。また、血管内皮細胞を用いた実験より血管新生の活性を増加させることが明らかになった。CD9およびCD9/81 KOマウス由来軟骨細胞は、エクソソームマーカーの発現低下を示すことより、CD9 KOマウスは、エクソソームの分泌が低下していることが示唆された。CD9およびCD9/81 KOマウス由来骨髄細胞より破骨細胞への分化能を調べた結果、顕著な違いは示されなかった(2)CD9 KOマウスにおけるOA発症への影響を検討するために、靭帯切除および一過性炎症モデルを用いた解析を行った。12週齢の野生型およびCD9 KOマウスに靭帯切除によるマウスOAモデルを作製し、12週後にサフランニン0染色による膝関節の病理組織学的な検討を行った。CD9 KOマウスは、野生型と比較して軟骨におけるプロテオグリンカン低下を含む軟骨変性が抑制されていた。また、AIAモデルでは、顕著な炎症抑制効果は示さなかったが、軟骨変性を抑制する傾向にあった。2.(1)正常滑膜細胞に比べてOA様滑膜細胞より分泌されるmiRNAは、29種類増加し、35種類が減少しており、正常細胞とは異なる種類や発現量であることがわかった。これら一連の研究は、分泌miRNAのOA発症の新たなメカニズムの解明につながると考えられる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
これまでヒト滑膜および軟骨細胞を用いたin vitro研究、そして、CD9ノックアウトマウスを用いた変形性関節症モデルの解析も計画通りに進行している。CD9/81ダブルノックアウトマウスの繁殖が思うように進まず変形性関節症モデルの作製・解析に着手できていないが、全体として概ね計画通りに進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初計画していた患者関節液を用いた解析は、関節液の粘性などの問題からエクソソームを精製するのが困難であるため、患者由来細胞の培養上清のみで解析を進める。その他は、研究計画通りに推進してく。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
研究計画通り施行したが2785円の繰越金が生じてしまったが、翌年度の研究計画以下1)～3)と合わせて適切に使用していく。1)OA様エクソソームの投与マウスとCD9/81ノックアウトマウスの病理組織学的解析2)In vivo蛍光イメージングシステムによるエクソソームの局在決定3)同定したmiRNAの機能解析に使用予定。
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