| 研究課題/領域番号 |
24700822
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 研究機関 | お茶の水女子大学 |
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研究代表者 |
曽根 保子 お茶の水女子大学, 生活環境教育研究センター, 助教 (80452027)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | ビタミンC / 免疫 / HL60 |
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| 研究概要 |
痛みや発熱、炎症などに重要な役割を果たすエイコサノイドは、アラキドン酸カスケードを経て合成される。一方、ビタミンCは強い抗酸化性をもっており、免疫系に関与する可能性があると考えられる。そこで、本研究ではビタミンCがアラキドン酸カスケードを介し、免疫応答系に関与するか、関与するのであればその経路、特定部位、特定物質との相互作用などを含めた具体的な作用機序を明らかにすることを目的とした。
平成24年度は、ビタミンCおよびその誘導体を負荷し、細胞毒性および細胞内取り込み量の検証などを実施したほか、免疫モデル系としてヒトマクロファージ・好中球を使い、アラキドン酸カスケードの主要律速酵素活性などについて、ELIZA法を用いて検討した。
その結果、ビタミンCはアラキドン酸カスケードに関与する可能性があるのではないかと考えられたが、具体的な作用機序については特定できなかった。現在は、特定の酵素のノックダウンを行った条件下でビタミンCの影響を検討するため、特定酵素のsiRNAによるノックダウン効率の検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
交付申請書に記載されている研究計画に従って研究を実施したところ、アラキドン酸カスケード主要律速因子のsiRNAノックアウトモデルの設計に時間を要したため、現在も引き続きsiRNAのノックダウン効率についての検証を行っている。したがって、交付申請書に記載された研究計画のうち、ビタミンCによる炎症性サイトカインの発現調節機構の解析については、検証が継続の状態となっており、現在までの研究の達成度はやや遅れをとっている。
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| 今後の研究の推進方策 |
１．自然免疫系・樹状細胞の活性化評価法のたちあげ: サポートアジュバント効果の検討として、In vitroの単純樹状細胞刺激評価系がある。これをHL-60細胞に対して用い、CD80/86の発現上昇を指標に樹状細胞活性化を評価可能かどうかの検証を行う。
２．ビタミンCとビタミンC誘導体のアジュバント効果の検討: 1．において検証を行った後、HL-60細胞でのCD80/86の発現上昇を指標にした樹状細胞活性化評価系を使い、ビタミンCおよびビタミンC誘導体によるアジュバント効果の検討を行う。ビタミンC誘導体にはアスコルビン酸-2-グルコシドなどを使用予定である。
３．フローサイトメトリーによるビタミンCによる免疫細胞サブセット分化誘導の評価: ビタミンCおよびビタミンC誘導体の負荷時における細胞分化プロファイルへの変化を解析する。抗体マーカー標識によりCD発現細胞サブセットをフローサイトメトリーによって検出し、その割合を評価する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
次年度使用額（229,537円）は、本研究にかかわる論文の原稿校正費用および雑誌掲載費用（89,000円）、該当年度中に開催される8th Asia Pacific Conference on Clinical Nutritionへの参加（研究発表）費用（40,500円）、ビタミンC測定用HPLC分析用消耗品（カラム、ガードカラム、前処理フィルタ、シリンジ、抽出試薬）（100,000円）に充当予定である。また、該当年度請求額については、交付申請書記載の使用計画に従う。
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