メモリーヘルパーＴ細胞の新規マスター遺伝子の単離と解析に基づく癌免疫療法の応用

2012 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24700991
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 藤木 文博 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (常勤) (40456926)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: 癌免疫療法 / ヘルパーＴ細胞 / メモリーＴ細胞 / エフェクターーＴ細胞 / マスター遺伝子

研究概要

これまでに我々はsingle cell由来のTh細胞クローンから分離した幹細胞様メモリーT細胞とエフェクターT細胞の遺伝子発現の差をマイクロアレイとリアルタイムPCRを用いて網羅的に解析した結果、幹細胞様の機能を有するメモリーT細胞で特異的に発現する8種類の遺伝子をマスター遺伝子の候補として同定した。昨年度までに、この8種類の候補遺伝子のうちの遺伝子#1(仮名)がメモリーT細胞の機能的細胞表面マーカーであるCD62LやCD127の発現、および抗アポトーシスに働く重要なタンパク質であるBcl-2の発現に関与することが明らかとなった。さらに我々は、メモリーT細胞ではなくエフェクターT細胞で特異的に高発現する遺伝子#10を同定した。このエフェクターT細胞で高発現する遺伝子により制御されるシグナルカスケードを合成化合物の添加により調節することで、T細胞の分化を制御できる可能性を見出した。つまり、そのシグナルカスケードを促進させるとエフェクターT細胞への分化が促進し、逆に阻害剤の添加によりメモリーT細胞への分化が促進した。さらに我々は、同定した遺伝子#1および遺伝子#10のT細胞における機能を詳細に解析するために、遺伝子#1および遺伝子#10をT細胞で特異的に欠損するコンディショナルノックアウトを作製し解析した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

24年度の目標であった遺伝子#1および遺伝子#10をT細胞で欠損するコンディショナルノックアウトマウスを作製し解析を始めることが出来た。さらに、遺伝子#1および遺伝子#10について、それぞれのプロモーターによって発現が制御されるようにレポーター遺伝子としてLacZが挿入されているノックインマウスを作製することが出来た。

今後の研究の推進方策

２４年度に引き続き、遺伝子#1および遺伝子#10コンディショナルノックアウトマウスの解析を行う。また、それぞれのコンディショナルノックアウトマウスにおけるT細胞の活性化やメモリーT細胞形成等の機能を詳細に解析するために、OVAタンパクを発現する組換えListeria monocytogenes (LM-OVA)を感染させOVA特異的T細胞の表現型・機能・動態を調査する。さらに、これらの解析結果をより明確にするために、OT-I Rag1-KOもしくはOT-II Rag1-KOバックグラウンドで、それぞれのコンディショナルノックアウトマウスを作製し感染実験を行う。
また、ノックインマウスを用いることでLM-OVA感染下における遺伝子#1および遺伝子#10のT細胞による発現を時空間的に解析する。

次年度の研究費の使用計画

該当なし

研究成果

• [雑誌論文] Functional human Th17 clones with WT1-specific helper activity (2013)
  • 著者名/発表者名: Tachino S, Fujiki F, et al
  • 雑誌名: Cancer Immunol Immunother 巻: 62 ページ: 801-10
  • DOI: 10.1007/s00262-012-1385-3
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of a Wilms' tumor 1-derived immunogenic CD4+ T-cell epitope that is recognized in the context of common Caucasian HLA-DR haplotypes (2013)
  • 著者名/発表者名: Anguille, Sébastien ; Fujiki, F. ; Smits, Evelien ; Oji, Y. ; Lion, Eva ; Oka, Y. ; Berneman, Zwi Nisan ; Sugiyama, H.
  • 雑誌名: Leukemia 巻: 27 ページ: 748-750
  • DOI: 10.1038/leu.2012.248
  • 査読あり
• [雑誌論文] HLA-DPB1*05: 01-restricted WT1332-specific TCR-transduced CD4+ T Lymphocytes Display a Helper Activity for WT1-specific CTL Induction and a Cytotoxicity Against Leukemia Cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Lin Y, Fujiki F, Katsuhara A, Oka Y, Tsuboi A, Aoyama N, Tanii S, Nakajima H, Tatsumi N, Morimoto S, Tamanaka T, Tachino S, Hosen N, Nishida S, Oji Y, Kumanogoh A, Sugiyama H.
  • 雑誌名: Journal of Immunotherapy 巻: 36 ページ: 159-170
  • DOI: 10.1097/CJI.0b013e3182873581
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recognition of a natural WT1 epitope by a modified WT1 peptide-specific T-cell receptor (2012)
  • 著者名/発表者名: Tamanaka T, Oka Y, Fujiki F, Tsuboi A, Katsuhara A, Nakajima H, Hosen N, Nishida S, Lin YH, Tachino S, Akatsuka Y, Kuzushima K, Oji Y, Kumanogoh A, Sugiyama H
  • 雑誌名: Anticancer Research 巻: 32 ページ: 5201-5209
  • 査読あり
• [学会発表] Cancer antigen WT1-specific helper and suppressive Th17 derived from a single precursor cell (2012)
  • 著者名/発表者名: Tachino Sho, Oka Yoshihiro, Fumihiro Fujiki, Tsuboi Akihiro, Tamanaka Taichi, Kondo Kenta, Hosen Naoki, Oji Yusuke, Kumanogoh Atsushi, Sugiyama Haruo
  • 学会等名: 日本免疫学会
  • 発表場所: 神戸国際会議場
  • 年月日: 20121205-20121207
• [学会発表] Biased usage of T cell receptor beta-chain variable region genes of cancer antigen WT1-specific CTLs in patients with solid tumors and healthy donors (2012)
  • 著者名/発表者名: Morimoto Soyoko, Oka Yoshihiro, Tsuboi Akihiro, Fujiki Fumihiro, Nakajima Hiroko, Hosen Naoki, Oji Yusuke, Kumanogoh Atsushi, Sugiyama Haruo
  • 学会等名: 日本免疫学会
  • 発表場所: 神戸国際会議場
  • 年月日: 20121205-20121207
• [学会発表] Development of HLA-DR4 transgenic mice useful for identification of CD4+ T cell epitope of tumor-associated antigens (2012)
  • 著者名/発表者名: Yatsuda Junji, Irie Atsushi, Michibata Yayoi, Harada Kumiko, Tomita Yusuke, Yuno Akira, Takeda Naoki, Shibuya Isao, Sogo Shinji, Fujiki Fumihiro, et al
  • 学会等名: 日本免疫学会
  • 発表場所: 神戸国際会議場
  • 年月日: 20121205-20121207
• [学会発表] CD4＋T細胞が認識するがん抗原ペプチドを迅速に同定できるHLA-DR4トランスジェニックマウスの樹立 (2012)
  • 著者名/発表者名: Yatsuda Junji, Irie Atsushi, Michibata Yayoi, Harada Kumiko, Tomita Yusuke, Yuno Akira, Takeda Naoki, Shibuya Isao, Sogo Shinji, Fujiki Fumihiro, et al
  • 学会等名: 日本癌学会
  • 発表場所: Royton Sapporo
  • 年月日: 20120919-20120921
• [学会発表] HLA-DR4拘束性CD4+Th細胞に抗原提示機能を有するHLA-DR4トランスジェニックマウスの樹立 (2012)
  • 著者名/発表者名: 入江厚、矢津田旬二、道端弥生、原田久美子、竹田直樹、澁谷功、十河真司、藤木文博、杉山治夫、西村泰治
  • 学会等名: 日本組織適合性学会
  • 発表場所: 明治大学駿河台キャンパス アカデミーコモン・リバティタワー
  • 年月日: 20120915-20120917
• [学会発表] Establishment of HLA-DR4 transgenic mice useful for rapid screening of HLA-DR4-restricted CD4+ T cell epitope peptides (2012)
  • 著者名/発表者名: Irie Atsushi, Yatsuda Junji, Michibata Yayoi, Harada Kumiko, Takeda Naoki, Shibuya Isao, Sogo Shinji, Fujiki Fumihiro, Sugiyama Haruo, Nishimura Yasuharu
  • 学会等名: 日本がん免疫学会
  • 発表場所: 北海道大学学術交流会館
  • 年月日: 20120726-20120728