非共有結合相互作用を有する小分子化合物の標的同定・作用解析研究

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24710244
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 南雲 陽子 筑波大学, 生命環境系, 助教 (70373339)
• キーワード: 小分子化合物 / 標的分子 / 非共有結合 / 作用機構 / 生理活性物質

研究概要

Rhizoxin を認識するポリクローナル抗体が得られたので、Rhizoxinとその標的分子であるtubulinとの複合体検出・結合部位解析を試みた。まずRhizoxinとtubulinの複合体形成条件を検討した。この際、メンブレン上にブロットされた複合体の抗Rhizoxin抗体による検出を試みたところ、検出することができた。したがってRhizoxinがtubulinと共有結合することが示唆された。Rhizoxinがtubulinと共有結合するという報告はこれまでになく、これは抗Rhizoxin抗体がなければ見出すのが困難だったと考えられる。またRhizoxin-tubulin複合体の抗体による検出ができたことになる。
次にRhizoxin-tubulin結合部位の解析を行った。Rhizoxin類縁体を用いてtubulinとの複合体の抗体検出を検討したところ、allyl epoxideのない類縁体では抗Rhizoxin抗体による検出効率が顕著に低まった。抗体の認識能力の違いの可能性もあるが、allyl epoxideをもってtubulinと共有結合する可能性が示唆された。さらにRhizoxinのtubulin結合部位を解析するため、複数の検討を行った。タンパク質はラベル化されると、そのpIや泳動パターンが変わる可能性がある。そこでRhizoxin-tubulin複合体を調製し、二次元電気泳動でRhizoxinラベル化されたtubulinのみの分離・検出を試みた。これまでにいくつかのデータが得られており、その結果に基づき結合部位モデリングも行った。現在はMSによる結合部位解析を検討中である。

研究成果

• [雑誌論文] Terpendole E and its Derivative Inhibit STLC- and GSK-1-Resistant Eg5 (2014)
  • 著者名/発表者名: Yuka Tarui, Takumi Chinen, Yoko Nagumo, Takayuki Motoyama, Toshiaki Hayashi, Hiroshi Hirota, Makoto Muroi, Yasuyuki Ishii, Hisae Kondo, Hiroyuki Osada and Takeo Usui
  • 雑誌名: ChemBioChem 巻: 15 ページ: 934-938
  • DOI: 10.1002/cbic.201300808
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Reversible Increase in Tight Junction Permeability Induced by Capsaicin Is Mediated via Cofilin-Actin Cytoskeletal Dynamics and Decreased Level of Occludin (2013)
  • 著者名/発表者名: Tomoko Shiobara, Takeo Usui, Junkyu Han, Hiroko Isoda, Yoko Nagumo
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 8 ページ: -
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0079954
  • 査読あり
• [備考] 筑波大学 臼井研究室
  • URL: http://www.agbi.tsukuba.ac.jp/~usui/study/top.html