生きた細胞内でのオートファジー発光定量法の開発

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24710259
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: ケミカルバイオロジー
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 服部 満 東京大学, 理学(系)研究科(研究院), 研究員 (20589858)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: ルシフェラーゼ / オートファジー

研究概要

細胞中のオートファジーを, 生きた細胞で検出するための発光検出系を開発した.発光タンパク質ルシフェラーゼを２断片に分割し, ルシフェラーゼ再構成を利用して, オートファジーの際に形成される小胞「オートファゴソーム」の構成成分にルシフェラーゼ断片を融合させる形でプローブを作製した.プローブをヒト培養細胞に導入したのち, 血清およびアミノ酸を除いた培地に置き換えてオートファジーを誘導した. 結果, 種々のプローブペアは発光を生じた. さらには異なるルシフェラーゼペアを導入する事で, より発光強度の強いオートファジー検出プローブの作製に成功した.

研究成果

• [雑誌論文] Bioluminescent Probes to Analyze Ligand- induced Phosphatidylinositol 3,4,5- trisphosphate Production with Split Luciferase Complementation Anal (2013)
  • 著者名/発表者名: Yang, L. Z., Nasu, Y., Hattori, M., Yoshimura, H., Kanno, A. and Ozawa, T
  • 雑誌名: Chem 巻: 85 ページ: 11352-11359
  • DOI: 10.1021/ac402278f
  • 査読あり
• [雑誌論文] ROS stress resets circadian clocks to coordinate pro- survival signals (2013)
  • 著者名/発表者名: Tamaru, T., Hattori, M., Ninomiya, Y., Kawamura, G., Vares, G., Honda, K., Mishra, D. P., Wang, B., Benjamin, I., Sassone- Corsi, P., Ozawa, T. and Takamatsu, K
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 ページ: e82006
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0082006
  • 査読あり
• [雑誌論文] Sustained Accurate Recording of Intracellular Acidification in Living Tissues with a Photo- controllable Bioluminescent Protein Proc (2013)
  • 著者名/発表者名: Hattori, M., Haga, S., Takakura, H., Ozaki, M. and Ozawa, T
  • 雑誌名: Nat. Acad. Sci. USA 巻: 110 ページ: 9332-9337
  • DOI: 10.1073/pnas.130405611
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analysis of temporal patterns of GPCR-β- arrestin interactions using split luciferase- fragment complementation Mol (2013)
  • 著者名/発表者名: Hattori, M., Tanaka, M., Takakura, H., Aoki, K., Miura, K., Anzai, T. and Ozawa, T
  • 雑誌名: BioSyst 巻: 9 ページ: 957-964
  • DOI: 10.1039/C2MB25443C
  • 査読あり
• [雑誌論文] Visualization and Quantitative Analysis of G Protein- Coupled Receptorβ- Arrestin Interaction in Single Cells and Specific Organs of Living Mice Using Split Luciferase Complementation (2012)
  • 著者名/発表者名: Takakura, H., Hattori, M., Takeuchi, M. and Ozawa, T
  • 雑誌名: ACS Chem. Biol 巻: 7 ページ: 901-910
  • DOI: 10.1021/cb200360z
  • 査読あり
• [学会発表] Bioluminescence analysis of relationship between the class of GPCR and temporal pattern of GPCR–b- arrestin interaction (2014)
  • 著者名/発表者名: 服部満, 田中みほ, 高倉栄男, 小澤岳昌
  • 学会等名: 日本化学会第94春季年会
  • 発表場所: 名古屋大学東山キャンパス(愛知県)
  • 年月日: 2014-03-28
• [学会発表] 高松研時計リセットシグナルによるROSストレス応答系の制御 (2013)
  • 著者名/発表者名: 田丸輝也, 服部満, 二宮康晴, 河村玄気, 小澤岳昌
  • 学会等名: 第20回日本時間生物学会学術大会
  • 発表場所: 近畿大学東大阪キャンパス(大阪府)
  • 年月日: 2013-11-09
• [学会発表] 生きた細胞内における内在性テロメアRNAの一分子動態解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 山田俊理, 吉村英哲, 服部満, 小澤岳昌
  • 学会等名: 日本生物物理学会第51回年会
  • 発表場所: 国立京都国際会館(京都府)
  • 年月日: 2013-10-28
• [学会発表] 光応答性ルシフェラーゼによる生きた組織下でのpH時間変化モニタリング法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 服部満, 芳賀早苗, 高倉栄男, 尾崎倫孝, 小澤岳昌
  • 学会等名: 日本分析化学会第62年会
  • 発表場所: 畿大学東大阪キャンパス(大阪府)
  • 年月日: 2013-09-12
• [学会発表] 受容体タンパク質DCCの光制御法の開発とその神経軸索誘導への応用 (2013)
  • 著者名/発表者名: 遠藤瑞己, 服部満, 小澤岳昌
  • 学会等名: 日本化学会第93回春季年会
  • 発表場所: 立命館大学びわこ・くさつキャンパス(滋賀県)
  • 年月日: 2013-03-25
• [学会発表] 緑色蛍光タンパク質を利用した生細胞内テロメアRNA可視化法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 山田俊理, 吉村英哲, 服部満, 小澤岳昌
  • 学会等名: 日本化学会第93回春季年会
  • 発表場所: 立命館大学びわこ・くさつキャンパス(滋賀県)
  • 年月日: 2013-03-23
• [学会発表] 概日リン酸化オシレータによる翻訳後修飾系の統合制御 (2012)
  • 著者名/発表者名: 田丸輝也, 服部満, 小澤岳昌, 高松研
  • 学会等名: 第19回日本時間生物学会学術大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場、マリンメッセ福岡(福岡県)
  • 年月日: 2012-12-14
• [学会発表] ヒートショック応答系による概日リズムのリセット (2012)
  • 著者名/発表者名: 田丸輝也, 服部満, 小澤岳昌, 高松研
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 北海道大学学術交流会館(北海道)
  • 年月日: 2012-09-15
• [学会発表] Development of light- induced protein- protein homodimerization systemto control axon guidance with blue light RSC Tokyo International Conference (2012)
  • 著者名/発表者名: 遠藤瑞己, 服部満, 小澤岳昌
  • 学会等名: JASIS Conference
  • 発表場所: 幕張メッセ(千葉県)
  • 年月日: 2012-09-06
• [学会発表] Newimaging systemfor monitoring an acidic environment in living tissue by photo- reactive luciferase RSC Tokyo International Conference (2012)
  • 著者名/発表者名: 服部満, 芳賀早苗, 高倉栄男, 尾崎倫孝, 小澤岳昌
  • 学会等名: JASIS Conference
  • 発表場所: 幕張メッセ(千葉県)
  • 年月日: 2012-09-06
• [図書] Clinic Neuroscience 32 (2) (2014)
  • 著者名/発表者名: 服部満, 田中みほ, 小澤岳昌
  • 総ページ数: 128-129
  • 出版者: 中外医学社