蛍光挿入型ｓｉＲＮＡアナログを用いたＲＮＡ干渉の作動機構の解明

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24750173
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 生体関連化学
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 神谷 由紀子 名古屋大学, エコトピア科学研究所, 講師 (00527947)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: RNAi / RNA結合タンパク質 / siRNA / miRNA / 機能性核酸 / 蛍光プローブ / クロスリンク / RNA-タンパク相互作用

研究概要

RNA干渉(RNAi)は20塩基対程度の短い二重鎖RNA(siRNA)により誘導され、その塩基配列に相補的な遺伝子の発現を抑制するシステムである。本研究ではsiRNAの細胞内動態やタンパク質との相互作用解析を行うためにsiRNAを蛍光基やクロスリンク基で化学修飾し、分析ツールとして利用可能なsiRNAのデザイン開発を行った。まず、化学修飾によって、RNAi活性の向上および副作用の抑制を両立するsiRNAの設計を見いだした。このデザインを応用して蛍光基及び消光剤を導入したsiRNAを合成することで、実際に、RNAiの活性本体であるmature RISCの選択的な可視化に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Selective labeling of mature RISC using siRNA carrying fluorophore-quencher pair (2013)
  • 著者名/発表者名: Y. Kamiya, A. Ito, H. Ito, M. Urushihara, J. Takai, T. Fujii, X.G. Liang, H. Kashida, and H. Asanuma
  • 雑誌名: Chem. Sci. 巻: 4 ページ: 4016-4021
  • 査読あり
• [雑誌論文] Light-driven DNA nanomachine with a photoresponsive molecular engine
  • 著者名/発表者名: Y. Kamiya and H. Asanuma
  • 雑誌名: Acc. Chem. Res. 巻: (In press)
  • 査読あり
• [学会発表] 光反応性クロスリンク基を導入した小分子RNAの設計と反応性の評価 (2014)
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子、津田弘貴、吉田健司、土居哲也、浅沼浩之
  • 学会等名: 日本化学会第94春季年会
  • 発表場所: 名古屋大学
  • 年月日: 20140300
• [学会発表] 色素対型siRNAを用いたRISC形成過程の可視化解析
  • 著者名/発表者名: 漆原雅朗・伊藤浩・藤井大雅・梁興国・伊藤杏奈・樫田啓・神谷由紀子•浅沼浩之
  • 学会等名: 第7回バイオ関連化学シンポジウム
• [学会発表] Design and development of the functionalized siRNA for studying RNAi
  • 著者名/発表者名: Y. Kamiya, J. Takai, M. Urushihara, H. Ito, X.G. Liang, A. Ito, K. Yoshida, T. Fujii, H. Kashida, and H. Asanuma
  • 学会等名: ISNAC2012
• [学会発表] 色素対型siRNAを用いたRISCの細胞内可視化解析
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子・伊藤杏奈・高井順矢・漆原雅朗・伊藤浩・藤井大雅・梁興国・樫田啓・浅沼浩之
  • 学会等名: 日本薬学会第133年会
• [学会発表] アンチセンス鎖と結合したmature RISCの選択的な可視化
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子、伊藤杏奈、高井順矢、漆原雅朗、伊藤浩、藤井大雅、梁興国、樫田啓、浅沼浩之
  • 学会等名: 第77回日本生化学会中部支部例会
• [学会発表] Development of Modified siRNA for Improvement of RNAi Activity and Monitoring in Cells
  • 著者名/発表者名: Y. Kamiya, J. Takai, M. Urushihara, H. Ito, X.G. Liang, A. Ito, K. Yoshida, T. Fujii, H. Kashida, H. Asanuma
  • 学会等名: 第62回高分子学会年会
• [学会発表] mature RISCを選択的に可視化する修飾siRNAの開発
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子、伊藤杏奈、高井順矢、樫田啓、浅沼浩之
  • 学会等名: 第15回日本RNA学会年会
• [学会発表] RISCを選択的に可視化する色素導入型siRNAの開発と細胞内イメージング解析
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子、伊藤杏奈、高井順矢、漆原雅朗、伊藤浩、藤井大雅、梁興国、樫田啓、浅沼浩之
  • 学会等名: 第23回バイオ・高分子シンポジウム
• [学会発表] 化学修飾による機能性siRNAの開発
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子
  • 学会等名: 名古屋大学予防早期医療創成センター第4回ワークショップ
  • 発表場所: 名古屋大学
  • 招待講演
• [学会発表] 非環状骨格を導入したsiRNAによるRNAi活性の向上と酵素耐性の獲得
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子、高井順矢,伊藤杏奈、村山恵司, 伊藤浩, 樫田啓, 浅沼浩之
  • 学会等名: 日本化学会第94春季年会
• [図書] "ナノ環境に優しい光応答性DNAの設計", 太陽エネルギー社会を築く材料テクノロジー(I) -材料・デバイス編-, 名古屋大学大学院工学研究科材料バックキャストテクノロジー研究センター編 (2013)
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子、浅沼浩之
  • 総ページ数: 192-210
  • 出版者: コロナ社
• [図書] "核酸医薬を目指した機能性siRNA", 最先端メディカルエンジニアリング第2版–名古屋大学最先端メディカルエンジニアリング編集委員会編 (2013)
  • 著者名/発表者名: 神谷由紀子、浅沼浩之
  • 総ページ数: 94-98
• [備考]
  • URL: http://www.nubio.nagoya-u.ac.jp/seigyo1/index.html