メチル化ＣｐＧに結合するＲＮＡの創出及び高感度メチル化ＣｐＧ検出法の開発

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24760647
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 東京工科大学 (2013); 東京農工大学 (2012)
• 研究代表者: 吉田 亘 東京工科大学, 応用生物学部, 助教 (10599806)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: アプタマー / in vitro selection / メチル化DNA

研究概要

本研究ではメチル化DNAに結合するRNAアプタマーを同定するために、メチル化CpGとメチル化二本鎖DNAを標的分子としてアプタマーのスクリーニングを実施した。5ラウンドのスクリーニングを実施したところ、濃縮されたライブラリーは4種類の配列に収束した。そこで、同定したRNAを合成し、メチル化二本鎖DNAまたは非メチル化二本鎖DNAに結合するか検討したところ、同定したRNAは両DNAに解離定数10nM程度で結合した。今後同定されたアプタマーの特異性を改良することにより、メチル化DNA特異的なアプタマーの同定が期待でき、それを用いたメチル化DNA検出方法の開発が期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Automatic polymerase chain reaction product detection system for food safety monitoring using zinc finger protein fused to luciferase. Anal (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshida W., Kezuka A., Murakami Y., Lee J., Abe K., Motoki H., Matsuo T., Shimura N., Noda M., Igimi S., Ikebukuro K.
  • 雑誌名: Chim. Acta 巻: 801 ページ: 78-83
  • DOI: 10.1016/j.aca.2013.08.019
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of histone modification by chromatin immunoprecipitation combined zinc finger luciferase-based bioluminescence resonance energy transfer assay (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshida W., Kezuka A., Abe K., Wakeda H., Nakabayashi K., Hata K., Ikebukuro K.
  • 雑誌名: Anal. Chem 巻: 85 ページ: 6485-6490
  • DOI: 10.1021/ac401036k
  • 査読あり
• [雑誌論文] Aptamer selection based on G4-forming promoter region (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshida W., Saito T., Yokoyama T., Ferri1 S., Ikebukuro K.
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 8 ページ: e65497
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0065497
  • 査読あり
• [学会発表] APTAMERIC ENZYME SUBUNIT ~ APTAMERS REGULATING ENZYME ACTIVITY BY BINDING WITH SPECIFIC TARGET~ (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshida W., Sode K., Ikebukuro K.
  • 学会等名: Enzyme Engineering XXII
  • 発表場所: Toyama International Conference Center
  • 年月日: 20130922-26
• [学会発表] ゲノム中のG-quadruplex形成配列情報に基づいたバイオマーカー結合アプタマーの探索 (2013)
  • 著者名/発表者名: 吉田亘、横山智美、齊藤大希、池袋一典
  • 学会等名: 日本化学会第93春季年会
  • 発表場所: 立命館大学
  • 年月日: 20130322-25
• [学会発表] In silicoアプタマー探索法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 吉田亘、齊藤大希、池袋一典
  • 学会等名: 第6回バイオ関連化学合同シンポジウム2012
  • 発表場所: 北海道大学
  • 年月日: 20120906-08
• [産業財産権] アプタマーの製造方法 (2012)
  • 発明者名: 池袋一典、吉田亘
  • 権利者名: 国立大学法人東京農工大学
  • 産業財産権種類: 特許権
  • 産業財産権番号: 特願2012-155095
  • 出願年月日: 2012-07-10