新規なＬ－アミノ酸脱水素酵素の機能と立体構造解析に基づく抗トリパノソーマ薬の開発

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24780105
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 応用生物化学
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 米田 一成 東海大学, 農学部, 講師 (00469397)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: 酵素化学 / L-スレオニン酸脱水素酵素 / NAD / トリパノソーマ

研究概要

病原性寄生原虫であるトリパノソーマのゲノム情報からL-スレオニン脱水素酵素(ThrDH)遺伝子を見出し、オーバーラップオリゴヌクレオチド用いて遺伝子合成を行った。合成したThrDH遺伝子をpCold TFベクターに挿入し、大腸菌を用いてIPTGによる遺伝子の発現を行い、発現産物の精製、及び機能解析を行った。その結果、SDS-PAGEで予測される分子量である81 KDaにバンドの検出に成功した。さらに、酵素活性の確認を行った結果、わずかではあるが、NAD依存性ThrDH活性の検出に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Crystallization and preliminary X-ray analysis of L-serine 3-dehydrogenase complexed with NADP^+ from the hyperthermophilic archaeon Pyrobaculum calidifontis (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoneda K, Sakuraba H, Araki T, Shibata T, Nikki T, Ohshima T
  • 雑誌名: Acta Crystallographica Section F 巻: Vol. 69 ページ: 134-136
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crystal Structure of the binary and ternary complexes of an archaeal UDP-galactose 4-epimerase-like L-threonine dehydrogenase from Thermoplasma volcanium (2012)
  • 著者名/発表者名: Yoneda K, Sakuraba H, Araki T, Ohshima T
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: Vol. 287 ページ: 12966-12974
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression, purification, crystallization and preliminary X-ray analysis of NAD(P)H-dependent carbonyl reductase specifically expressed in the thyroidectomized chicken fatty liver (2012)
  • 著者名/発表者名: Yoneda K, Fukuda Y, Shibata T, Araki T, Nikki T, Sakuraba H, Ohshima T
  • 雑誌名: Acta Crystallographica Section F 巻: Vol. 68 ページ: 1568-1570
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crystal Structure of Novel Dye-linked L-Proline Dehydrogenase from Hyperthermophilic Archaeon Aeropyrum pernix (2012)
  • 著者名/発表者名: Sakuraba H, Satomura T, Kawakami R, Kim K, Hara Y, Yoneda K, Ohshima T
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: Vol. 287 ページ: 20070-20080
  • 査読あり
• [雑誌論文] Structure of a UDP-glucose dehydrogenase from the hyperthermophilic archaeon Pyrobaculum islandicum (2012)
  • 著者名/発表者名: Sakuraba H, Kawai T, Yoneda K, Ohshima T
  • 雑誌名: Acta Crystallographica Section 巻: Vol. 68 ページ: 1003-1007
  • 査読あり
• [学会発表] トリパノソーマ由来NAD依存性L-スレオニン脱水素酵素の性質と構造 (2013)
  • 著者名/発表者名: 米田一成、櫻庭春彦、荒木朊洋、大島敏久
  • 学会等名: 第13回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: とりぎん文化会館
  • 年月日: 2013-06-12
• [学会発表] トリパノソーマ由来NAD依存性L-スレオニン脱水素酵素の機能解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 米田一成、櫻庭春彦、荒木朊洋、大島敏久
  • 学会等名: 日本農芸化学会2013年度大会
  • 発表場所: 東北大学
  • 年月日: 2013-03-25
• [学会発表] 新規な補酵素NAD(P)依存性L-スレオニン脱水素酵素の機能と構造解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 米田一成
  • 学会等名: 第1回佐賀大学総合分析実験センターシンポジウム
  • 発表場所: 佐賀大学
  • 年月日: 2013-03-18
  • 招待講演
• [備考]
  • URL: http://www2.ktokai-u.ac.jp/~nougaku/Bio/yoneda/yoneda.htm