ＭＨＣクラスＩ分子を介したヘルペスウイルス細胞内侵入機構の解明

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24780279
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 佐々木 道仁 北海道大学, 学内共同利用施設等, 研究員 (70609403)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: ヘルペスウイルス / ウマ / レセプター / MHCクラスI / ウサギ

研究実績の概要

本年度は昨年度に作製した可溶化EHV-4 gD組換えタンパク質（sgD4）と可溶化EHV-1 gD組換えタンパク質（sgD1）を用いて、EHV-1とEHV-4の細胞内侵入機構に関して更なる解析を実施した。
ウマ培養細胞株E.Dermでは、sgD1またはsgD4の前処理によりEHV-1とEHV-4の細胞内侵入が阻害された。したがって、EHV-1とEHV-4は共通のレセプター分子を介してE.Derm細胞内に侵入することが判明した。一方、ウサギ培養細胞株RK13とチャイニーズハムスター培養細胞株CHO-K1ではsgD1はEHV-1の細胞内侵入を阻害したものの、sgD4はEHV-1の細胞内侵入を阻害せず、これらの細胞におけるEHV-1独自の細胞内侵入機構の存在が示唆された。
昨年度までにウサギMHCクラスI遺伝子クローンA31がウマMHCクラスI遺伝子クローンA68に比べてEHV-1とEHV-4のレセプターとしての機能が低いことを確認している。そこで、本年度はA31のレセプター機能に関して更なる解析を実施した。過去の研究報告でウマMHCクラスIの173番目のアミノ酸が疎水性アミノ酸であることがEHV-1レセプター機能に重要であることが示されている。一方、A31は173番目に親水性アミノ酸スレオニンをコードしている。そこで、A31の173番目のアミノ酸をアラニンに置換した変異体（A31 T173A）を作製し細胞に発現させたところ、A31 T173A発現細胞はA31発現細胞に比べてEHV-1とEHV-4の感受性が上昇しており、ウサギMHCクラスIにおいても173番目のアミノ酸がレセプター機能に重要であることが判明した。

研究成果

• [雑誌論文] Metagenomic analysis of the shrew enteric virome reveals novel viruses related to human stool-associated viruses. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sasaki M, Orba Y, Ueno K, Ishii A, Moonga L, Hang'ombe BM, Mweene AS, Ito K, Sawa H.
  • 雑誌名: Journal of General Virology 巻: 96 ページ: 440-452
  • DOI: 10.1099/vir.0.071209-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation and characterization of a novel alphaherpesvirus in fruit bats. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sasaki M, Setiyono A, Handharyani E, Kobayashi S, Rahmadani I, Taha S, Adiani S, Subangkit M, Nakamura I, Sawa H, Kimura T.
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 88 ページ: 9819-9829
  • DOI: 10.1128/JVI.01277-14
  • 査読あり
• [学会発表] Metagenomic Analysis of Shrew Fecal Viral Flora (2014)
  • 著者名/発表者名: Sasaki M, Orba Y, Ueno K, Ishii A, Ito K, Sawa H
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（横浜）
  • 年月日: 2014-11-25 – 2014-11-27
• [学会発表] 糞便メタゲノム解析によるジネズミ保有ウイルスの検索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 佐々木道仁、大場靖子、上野恵介、石井秋宏、伊藤公人、澤洋文
  • 学会等名: 第62回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（横浜）
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-12