新規ＧＰＣＲシグナル検出系ＴＧＦα切断アッセイを用いたＧＰＣＲのリガンド探索

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24790064
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 井上 飛鳥 東北大学, 薬学研究科(研究院), 助手 (50525813)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: Gタンパク質共役型受容体 / GPCR / TGFalpha / リゾリン脂質 / リゾホスファチジルセリン / CRISPR / HEK293 / エクトドメイン切断

研究概要

本研究において、研究代表者が独自に開発したトランスフォーミング増殖因子アルファ（TGFα）切断アッセイを用い、Gタンパク質共役型受容体（GPCR）のリガンド探索を行った。並行して共役する三量体Gタンパク質の評価系を構築した。リゾホスファチジルセリンにより特異的に活性化される3種類の受容体（P2Y10, GPR174, A630033H20）、リゾホスファチジルグルコースにより活性化される1種類の受容体、酸化リン脂質に応答する2種類の受容体を同定した。CRISPR-Cas9システムを用いてGタンパク質欠損HEK293細胞を作製し、Gタンパク質の共役活性を定量的に評価できる手法を確立した。

研究成果

• [雑誌論文] Overexpression of autotaxin, a lysophosphatidic acid-producing enzyme, enhances cardia bifida induced by hypo-sphingosine-1-phosphate signaling in zebrafish embryo (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakanaga K, Hama K, Kano K, Sato T, Yukiura H, Inoue A, Saigusa D, Tokuyama H, Tomioka Y, Nishina H, Kawahara A, Aoki J
  • 雑誌名: Journal of Biochemistry 巻: 155 ページ: 235-41
  • DOI: 10.1093/jb/mvt114
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prestwich GD. Phosphorothioate analogs of sn-2 radyl lysophosphatidic acid (LPA) : metabolically stabilized LPA receptor agonists (2013)
  • 著者名/発表者名: Jiang G, Inoue A, Aoki J
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 巻: 23 ページ: 1865-9
  • DOI: 10.1016/j.bmcl.2013.01.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel mutation, c.699C>G (p.C233W), in the LIPH gene leads to a loss of the hydrolytic activity and the LPA6 activation ability of PA-PLA1a<alpha> in autosomal recessive woolly hair/hypotrichosis (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa M, Nakamura M, Farooq M, Inoue A, Aoki J, Shimomura Y
  • 雑誌名: Journal of Dermatological Science 巻: 72 ページ: 61-4
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2013.05.001
  • 査読あり
• [雑誌論文] TGFαshedding assay : an accurate and versatile method for detecting GPCR activation (2012)
  • 著者名/発表者名: Inoue A, Ishiguro J, Kitamura H, Arima N, Okutani M, Shuto A, Higashiyama S, Ohwada T, Arai H, Makide K, and Aoki J
  • 雑誌名: Nature Methods 巻: 9 ページ: 1021-9
  • DOI: 10.1038/nmeth.2172
  • 査読あり
• [学会発表] Dissecting G protein coupling of GPCRs using chimeric Gαsubunits and TGFαshedding assay (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue A, Aoki J
  • 学会等名: International Conference on Pharmacology and Drug Development (ICoPaDD)
  • 発表場所: University of Singapore, Singapore
  • 年月日: 20131209-11
• [学会発表] Identification and analysis of GPCRs that recognize oxidized phospholipids (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue A, Ishiguro J, Aoki J
  • 学会等名: 第86回日本生化学会大会
  • 発表場所: 横浜、神奈川
  • 年月日: 20130911-13
• [学会発表] A new tool to analyze G protein coupling of lipid mediator receptors (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue A, Aoki J
  • 学会等名: FASEB Summer Research Conferences, Lysophospholipid and other Related Mediators - From Bench to Clinic
  • 発表場所: Niseko, Hokkaido, Japan.
  • 年月日: 20130804-09
• [学会発表] TGFαのエクトドメイン切断を利用した新規GPCRリガンド探索のアッセイ系 (2013)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥、青木淳賢
  • 学会等名: 第10回GPCR研究会
  • 発表場所: お台場、東京
  • 年月日: 20130510-11
• [学会発表] A tool to comprehensively dissect G protein coupling of GPCRs : application of TGFαshedding assay and co-expression of chimeric Gαsubunits (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue A, Aoki J
  • 学会等名: Gordon Research Conferences, Molecular Pharmacology. Renaissance Tuscany Il Ciocco Resort
  • 発表場所: Lucca (Barga), Italy.
  • 年月日: 20130428-0503
• [学会発表] TGFα切断を用いたGPCRと三量体Gタンパク質の共役活性の評価系の確立 (2013)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥、青木淳賢
  • 学会等名: 日本薬学会第133年会
  • 発表場所: 横浜、パシフィコ横浜
  • 年月日: 20130328-30
• [学会発表] 毛髪形成メカニズムから派生したGタンパク質共役型受容体(GPCR)の新規検出系の開発とその応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥、石黒純、巻出久美子、青木淳賢
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡、福岡国際会議場
  • 年月日: 20121214-16
• [学会発表] TGFα切断を用いた脂質メディエーター受容体の検出法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥、石黒純、巻出久美子、青木淳賢
  • 学会等名: 第54回日本脂質生化学
  • 発表場所: 福岡、九州大学
  • 年月日: 20120607-08
• [図書] リゾホスファチジン酸(LPA)の生理的機能」(総説)、医学のあゆみ,生命を支える脂質−最新の研究と臨床248 (2014)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥、青木淳賢
• [図書] 「【最新生理活性脂質研究-実験手法、基礎的知識とその応用-】(第1章)技術編TGFα切断を用いたGPCR活性化の新しい検出法」(解説)、遺伝子医学MOOK 24 (2013)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥、青木淳賢
• [図書] 【最新生理活性脂質研究-実験手法、基礎的知識とその応用-】(第1章)技術編TGFα切断を用いたGPCR活性化の新しい検出法(解説) (2013)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥
• [図書] TGFα切断を用いたGPCRの高感度・高精度な活性化検出法」(解説)、実験医学31 (2013)
  • 著者名/発表者名: 井上飛鳥、青木淳賢
• [備考]
  • URL: http://www.pharm.tohoku.ac.jp/~seika/H24/index.html
• [産業財産権] Gタンパク質共役型受容体のシグナル伝達の検出方法 (2014)
  • 発明者名: 青木淳賢、井上 飛鳥
  • 権利者名: 青木淳賢、井上 飛鳥
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: PCT/JP2014/000992
  • 出願年月日: 2014-02-25
  • 外国