新規抑制型抗体によるヒトＴＬＲ４機能抑制性エピトープの同定と新規活性制御法の開発

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 24790112
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 創薬化学
• 研究機関: 東北大学 (2013); 佐賀大学 (2012)
• 研究代表者: 塚本 宏樹 東北大学, 薬学研究科(研究院), 助教 (70423605)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: TLR4 / MD-2 / リポ多糖 / モノクローナル抗体 / 敗血症 / 抗体医薬

研究概要

本研究では、新規敗血症治療薬の抗体医薬品シーズとして期待される抑制型ヒトToll-like receptor 4(TLR4)モノクローナル抗体の作製に成功した。両抗体は、lipopolysaccharide(LPS)誘導性のサイトカイン産生、補助刺激分子の発現誘導、NFκBの活性化を抑制することを明らかにした。また、両抗体のTLR4抑制機序は、抗体による不活性型TLR4多量体構造の誘導、LPS刺激によるTLR4内在化の抑制に依存し、TLR4とLPSの結合に依存しない新規作用機序であった。更に、TLR4細胞外ドメインに抗体医薬品の創薬標的となり得る機能抑制性エピトープの存在を明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] A validated quantitative liquid chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry method for monitoring isotopologues to evaluate global modified cytosine ratios in genomic DNA (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsuji M, Matsunaga H, Jinno D, Tsukamoto H, Suzuki N, Tomioka Y
  • 雑誌名: J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 巻: 953-954 ページ: 38-47
  • DOI: 10.1016/j.jchromb.2014.01.050.
  • 査読あり
• [雑誌論文] An Assay forα1,6-Fucosyltransferase (FUT8) Activity based on the HPLC Separation of a Reaction Product with Fluorescence Detection (2013)
  • 著者名/発表者名: Ihara H, Tsukamoto H, Taniguchi N, Ikeda Y
  • 雑誌名: Methods Mol Biol 巻: 1022 ページ: 335-48
  • DOI: 10.1007/978-1-62703-465-4_25
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Delicate Balance–CD73 generated adenosine limits the severity of graft vs. host disease, but also constrains the allogeneic graft vs. tumor effect (2013)
  • 著者名/発表者名: Thompson LF, Tsukamoto H, Chernogorova P, Zeiser R
  • 雑誌名: OncoImmunology 巻: 2(1) ページ: 22107
  • DOI: 10.4161/onci.22107
  • 査読あり
• [雑誌論文] MD-2-dependent human Toll-like receptor 4 monoclonal antibodies detect extracellular association of Toll-like receptor 4 with extrinsic soluble MD-2 on the cell surface (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto H, Ihara H, Ito R, Ukai I, Suzuki N, Kimoto M, Tomioka Y, Ikeda Y
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 440(1) ページ: 31-36
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.09.004
• [雑誌論文] Difucosylation of chitooligosaccharides by eukaryote and prokaryoteα1,6-fucosyltransferases (2013)
  • 著者名/発表者名: Ihara H, Hanashima S, Tsukamoto H, Yamaguchi Y, Taniguchi N, Ikeda Y
  • 雑誌名: Biochim Biophys Acta 巻: 1830(10) ページ: 4482-4490
  • DOI: 10.1016/j.bbagen.2013.05.013.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibition of antibody production in vivo by pre-stimulation of Toll-like receptor 4 before antigen priming is caused by defective B cell priming and not impairment in antigen presentation (2013)
  • 著者名/発表者名: Rachmawati NM, Fukudome K, Tsuneyoshi N, Bahrun U, Tsukamoto H, Yanagibashi T, Nagai Y, Takatsu K, Ohta S, Kimoto M
  • 雑誌名: Int Immunol. 巻: 25(2) ページ: 117-128
  • DOI: 10.1093/intimm/dxs096.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reduced surface expression of TLR4 by a V254I point mutation accounts for the low responder phenotype of BALB/c B cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto H, Fukudome K, Takao S, Tsuneyoshi N, Ohta S, Nagai Y, Ihara H, Miyake K, Ikeda Y, Kimoto M
  • 雑誌名: J Immunol 巻: 190(1) ページ: 195-204
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1201047
  • 査読あり
• [雑誌論文] Multiple potential regulatory sites of TLR4 activation induced by LPS as revealed by novel inhibitory human TLR4 mAbs (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto H, Fukudome K, Takao S, Tsuneyoshi N, Ihara H, Ikeda Y, Kimoto M
  • 雑誌名: Int Immunol 巻: 24(8) ページ: 495-506
  • DOI: 10.1093/intimm/dxs053
  • 査読あり
• [雑誌論文] Measurement of peroxiredoxin-4 in rat tissues and implication of its serum level as a potential marker for hepatic disease (2012)
  • 著者名/発表者名: Ito R, Takahashi M, Ihara H, Tsukamoto H, Fujii J, Ikeda Y
  • 雑誌名: Mol Med Report 巻: 6(2) ページ: 379-384
  • DOI: 10.3892/mmr.2012.935.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Deficiency of CD73/ecto-5'-nucleotidase in mice enhances acute graft-versus-host disease (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto H, Chernogorova P, Ayata K, Gerlach UV, Rughani A, Ritchey JW, Ganesan J, Follo M, Zeiser R, Thompson LF, Idzko M
  • 雑誌名: Blood 巻: 119(19) ページ: 4554-4564
  • DOI: 10.1182/blood-2011-09-375899.
  • 査読あり
• [学会発表] リコカルコンAのCOX-1活性抑制メカニズムの解明 (2014)
  • 著者名/発表者名: 菅原大貴、田代匠、三枝大輔、塚本宏樹、奥田亜沙、小原祐太郎、鈴木直人、富岡佳久
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本
  • 年月日: 20140328-30
• [学会発表] 抗1-methyladenosine抗体反応性分子の同定を目的としたtRNA分子種の解析法に関する研究 (2014)
  • 著者名/発表者名: 津久井佑梨、陣野大輔、三島英換、鈴木直人、塚本宏樹、三枝大輔、伊藤邦彦、阿部高明、富岡佳久
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本
  • 年月日: 2014-03-28
• [学会発表] MD-2-dependent and lipopolysaccharide-induced conformation change-sensitive monoclonal antibodies detect extracellular association of human toll-like receptor 4 with soluble MD-2 on cell surface (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto H, Ukai I, Kimoto M
  • 学会等名: 第42回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 千葉
  • 年月日: 20131211-13
• [学会発表] 新規腎障害マーカーとしての1-メチルアデノシンの検討 (2013)
  • 著者名/発表者名: 陣野大輔、鈴木直人、津久井佑梨、三枝大輔、三島英換、鈴木千登世、塚本宏樹、阿部高明、富岡佳久
  • 学会等名: 第52回日本薬学会東北支部大会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2013-10-20
• [学会発表] LC/ESI‐MSを用いた血清胸腺因子(FTS)定量法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中曽根正皓、鈴木直人、金光祥臣、塚本宏樹、富岡佳久
  • 学会等名: 第52回日本薬学会東北支部大会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2013-10-20
• [学会発表] Reduced surface expression of TLR4 by a V254I point mutation may account for the low LPS responder phenotype of BALB/c B cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto H, Fukudome K, Takao S, Tsuneyoshi N, Ohta S, Nagai Y, Ihara H, Miyake K, Ikeda Y, Kimoto M
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20121214-16
• [学会発表] Enzymatic synthesis of di-fucosylated chitooligosaccharide by human and rhizobiaα1,6-fucosyltransferases (2012)
  • 著者名/発表者名: Ihara H, Hanashima S, Tsukamoto H, Yamaguchi Y, Taniguchi N, Ikeda Y
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20121214-16
• [学会発表] Inhibition of antibody production in vivo by pre-injection of agonistic anti-TLR4/MD-2 monoclonal antibody before antigen priming is caused not by impairment in antigen presentation but by defective B cell priming (2012)
  • 著者名/発表者名: Rachmawati NM, Fukudome K, Tsuneyoshi N, Bahrun U, Tsukamoto H, Ohta S, Kimoto M
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20121205-07
• [図書] Handbook of Glycosyltransferases and Related Genes, Mannosyl (β-1,4-)-glycoproteinβ-1,4-N-acetylglucosaminyltransferase (MGAT3);β1,4-N-Acetylglucosaminyltransferase III (GnT-III, GlcNAc-T III)(Taniguchi N, Honke K, Fukuda M, Narimatsu H, Yamaguchi Y, Angata T, eds) (2014)
  • 著者名/発表者名: Ikeda Y, Ihara H, Tsukamoto H, Gu J, Taniguchi N
  • 総ページ数: 209-222
  • 出版者: Springer Japan (Tokyo, Japan)
• [図書] Handbook of Glycosyltransferases and Related Genes(FUT8), Fucosyltransferase 8. GDP-fucose N-glycan coreα6-fucosyltransferase(Taniguchi N, Honke K, Fukuda M, Narimatsu H, Yamaguchi Y, Angata T, eds) (2014)
  • 著者名/発表者名: Ihara H, Tsukamoto H, Gu J, Miyoshi E, Taniguchi N, Ikeda Y
  • 総ページ数: 581-596
  • 出版者: Springer Japan (Tokyo, Japan)
• [産業財産権] 炎症治療用医薬組成物 (2012)
  • 発明者名: 木本雅夫、塚本宏樹、福留健司、常吉直子
  • 権利者名: 佐賀大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2012‐135989
  • 出願年月日: 2012-06-15