| 研究課題/領域番号 |
24790216
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
佐藤 聡 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (40530663)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| キーワード | 細胞死制御 / ネクローシス / アポトーシス / 転写因子 / MicroRNA / マイクロアレイ / Hsp90 / 5-Fluoro-2'-deoxyuridine |
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| 研究概要 |
本研究は、細胞がネクローシスで死ぬかアポトーシスで死ぬかを決定づける因子の探索とその機能解析を行い、細胞死の制御機構を明らかにすることを目的としている。我々は抗がん剤5-Fluoro-2’-deoxyuridine (FUdR)を作用させるとネクローシスを起こす哺乳動物細胞FM3A細胞F28-7株と変異株でアポトーシスを起こすF28-7-A株を細胞死の解析モデルとして研究を行い、これまでに細胞死を制御する因子としてLamin-B1、Cytokeratin-19、Hsp90を見出している。平成２４年度は以下の研究成果を得た。
（１）これまでの研究から見出している細胞死制御因子の候補について、siRNAを用いて機能解析を行なった。ネクローシスを起こしている細胞で発現が増加する２つの転写因子を、それぞれノックダウンすると、本来ネクローシスを起こす細胞がアポトーシスを起こすことを明らかにした。
（２）FUdRを作用させるとネクローシスを起こす細胞に、Hsp90阻害剤であるGeldanamycinを併用すると、アポトーシスを起こす。この時、Hsp90の阻害により、ネクローシスで増加するこれら２つの転写因子の発現がmRNAレベルで抑制されていることを明らかにした。
（３）マイクロアレイを用いて、これら細胞株で発現しているMicroRNA (miRNA)を調べた。その結果、ネクローシスを起こす細胞とアポトーシスを起こす細胞でそれぞれ特徴的に発現しているmiRNAを見出した。
今後、新たに細胞死の制御因子として同定した転写因子と、これまでに明らかにしている制御因子との関連性を調べることで、細胞死の制御機構の一端が明らかになると考える。また、候補因子として見出したmiRNAの機能解析を行なうことで、ネクローシスとアポトーシスを制御するmiRNAを明らかに出来ると考える。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成２４年度に計画していた研究を順調に実施しており、現在までに以下の研究成果が得られている。
（１）これまでの研究から見出している細胞死制御因子の候補について、siRNAを用いた機能解析を行い、新たにネクローシスとアポトーシスの制御因子として２つの転写因子を見出した。
（２）Hsp90の機能阻害により、ネクローシスで増加する転写因子の発現がmRNAレベルで抑制されていることを明らかにした。
（３）細胞死を制御する可能性のある候補因子として、ネクローシスを起こす細胞とアポトーシスを起こす細胞でそれぞれ特徴的に発現しているMicroRNAを見出した。
このように、おおむね順調に研究が進展していると考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成２４年度の研究成果を基にして、ネクローシスとアポトーシスの細胞死制御機構における制御因子の役割を明らかにする。今後の研究の推進方策としては以下の研究を計画している。
（１）平成２４年度までの研究から見出している細胞死の制御因子（転写因子、Lamin-B1、Cytokeratin-19、Hsp90）間の関連性を調べる。
（２）分子シャペロンであるHsp90と細胞死制御因子（転写因子、Lamin-B1、Cytokeratin-19）との相互作用の有無を解析する。
（３）細胞死制御因子をそれぞれ過剰発現させ、ネクローシスとアポトーシスの細胞死表現系に与える影響を検討する。
（４）細胞死制御因子の候補として見出しているMicroRNAの細胞死における役割を調べる。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
該当無し
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