| 研究課題/領域番号 |
24790446
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
浜崎 隆之 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 研究員 (30448576)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| キーワード | HIV-1 / 低分子化合物 / cyclin T1 / Tat |
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| 研究概要 |
HIV-1の転写過程に必要とされるCyclin T1-Tat-TAR複合体を標的とする化合物Cの作用機序を調べるために、Cyclin T1とTatの相互作用を免疫沈降法により調べた。その結果、化合物Cは、Cyclin T1とCDK9との相互作用に影響を与えずに、Cyclin T1とTatの相互作用を特異的に阻害することが示された。これらのデータは、化合物CがCyclin T1のTat、TAR相互作用サイトを標的としたin silicoスクリーニングにより得られた薬剤であることを証明している。
さらに、これらの結果を確かめるために以下の実験を行った。HIV-1の転写過程において、HIV-1 LTR上でCDK9-Cyclin T1-Tat-TAR複合体が形成され、CDK9によりRNA polymerase IIのC末端領域にあるセリン残基がリン酸化をうけ、HIV-1 genome RNAが効率的に転写されることが知られており、このリン酸化に化合物Cが与える影響を調べた。その結果、化合物Cは、RNA polymerase IIのリン酸化を濃度依存的に減少させた。
これらの結果から、化合物Cは、cyclin T1とTatの相互作用を阻害することでHIV-1 LTR上でCDK9-Cyclin T1-Tat-TAR複合体の形成を阻止し、HIV-1 genome RNAの効率的な転写を減少させることが示された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度の研究で、cyclin T1を標的とするin silicoスクリーニングから同定された化合物Cの作用機序をin vitroで、分子レベルで証明した。一方で、本年度予定していた、顕微鏡観察によるcyclin T1の細胞内動態やChIP法によるHIV-1 LTR上のcyclin T1の分布に化合物Cが与える影響についての解析を行うためのアッセイ系の立ち上げに時間を要している。
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| 今後の研究の推進方策 |
昨年度の本研究の結果より、化合物Cは、in silicoスクリーニングの結果と一致して、Tatとcyclin T1の結合を阻害し、CDK9によるRNA polymerase IIのリン酸化を抑制し、HIV-1 genome RNAの転写を阻止することが示唆されたので、本年度は、これらの結果を分子レベルで、より詳細に明らかにするとともに、Tatとcyclin T1の相互作用面を標的とするHIV-1産生制御による、新規抗エイズ療法の可能性を検討する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
顕微鏡観察によるcyclin T1の細胞内動態やChIP法によるHIV-1 LTR上のcyclin T1の分布を評価する系を速やかに確立するとともに、HIV感染細胞において、cyclin T1-Tat相互作用、cyclin T1細胞内挙動、cyclin T1のLTR上の分布に化合物Cが与える影響も並行して解析する。また、化合物Cの類似体の抗HIV-1活性を評価する。
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