| 研究概要 |
水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)の感染防御には、細胞障害性T細胞を主力とする細胞性免疫(CMI)が大きく関わっている。CMIを誘導するVZVの主要な抗原を明らかにするため、ELISPOT法による抗原のスクリーニングを行った。他のヘルペスウイルスで既知のCMI抗原蛋白は核に存在することから、21種のVZV核蛋白を個別に発現させたHEK293T細胞の核抽出液を抗原とし、20名の水痘既往のある健常人ボランティアから得た末梢血単核球(PBMC)にCMI応答を共通して誘導する蛋白を探索した。結果、ORF8, 61, 62, 63, 66は80％以上の検体でCMI応答を誘導した。このうちORF62, 63の抗原性は既知であるが、最も強く高頻度にCMIを誘導したのはORF63であった。ORF8, 61, 66は今回の我々の検討で初めて明らかとなった。
このうち、ORF61, 66のCMI抗原となるエピトープの同定を試みた。エピトープ領域を絞り込むため、ORF61, 66をそれぞれ3断片に分けて抗原とし、ORF61, 66に対し強いCMI応答を引き起こした4名の健常人PBMCを用いて比較した。結果、ORF66は共通したCMI応答が見られず以降の解析を断念した。ORF61はC末端断片で共通して応答が見られたことから、この領域をカバーする22種のオリゴペプチドを抗原としたELISPOT法によりエピトープ同定を試みた。結果、ORF61のアミノ酸番号288-307及び348-367の2配列で共通してCMI応答が見られ、これら領域がエピトープと考えられた。
これまで一般的に用いられてきたVZV特異的CMI定量ELISPOTでは、VZV粒子を含む感染細胞抽出液が用いられてきたが、本研究成果は標準化した抗原を用いた定量法が樹立できる可能性を示唆する。これらの成果をまとめた論文を近日中に投稿予定である。
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