遺伝性糖尿病ＭＯＤＹの病態解析のためのヒトｉＰＳ細胞の膵β細胞分化誘導系の開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24790730
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 今野 雅允 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 寄附講座助教 (80618207)
• キーワード: 膵臓学 / 膵β細胞 / 糖尿病 / iPS細胞 / MODY

研究概要

1)タンパク質導入至適条件及び候補転写因子の決定タンパク質を効率良く導入可能な条件の決定として、11Rと融合型EGFPベクター構築を、タンパク質を精製した。精製タンパク質を細胞培養上清へ添加し、陽性細胞の割合を検討した結果8割以上の細胞がタンパク質を取り込んでいることが確認された。また、11R融合転写因子タンパク質及び11R-TEVprotease 認識配列融合タンパク質の精製を目指し、ベクター構築を行った。このベクターへ搭載する転写因子を20種決定し、プラスミドへ挿入した。
2)MODY 患者由来 iPS 細胞の樹立　MODY 患者(MODY1, 3, 5)から得た繊維芽細胞にOct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc を導入し、患者由来 iPS 細胞を樹立した。このiPS細胞は正常iPS細胞と同様の多能性を持つことが示された。
3) 膵ベータ細胞への分化誘導　健常人由来 iPS 細胞を用いて決定した導入条件で転写因子タンパク質のセットを MODY 患者由来 iPS 細胞培養上清へ添加し膵ベータ細胞へ分化誘導した。分化誘導した膵ベータ細胞の遺伝子発現解析やインスリン分泌能をin vitroで測定し、健常人由来細胞と比較したが、分化誘導効率が低く健常人と患者間での有意な差は認められなかった。
4) 糖尿病モデルマウス作成　STZを腹腔内投与し、血糖値が 400mg/dl 以上になり、かつ生存率が良い STZ 濃度および週令を決定した後、安定して糖尿病モデルマウスを作成することに成功した。
5) 生体内での機能解析　健常人及び患者由来膵ベータ細胞を、糖尿病モデルマウス腎皮膜下に移植して、血糖値測定により糖尿病改善効果を調べた。移植後の経過日数が短かったため、生着率、遺伝子発現、インスリン分泌能、糖経口投与によるグルコース応答性を検討したが健常人とMODY患者間での有意な差は認められなかった。

研究成果

• [雑誌論文] Jumonji/Arid1b (Jarid1b) Maintains Stem-like Slow-Cycling Cells of Human Esophageal Cancer. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kano, Y., Ishii, H., Konno, M., Tanaka, K., Ohta, K., Kagawa, Y., Haraguchi, N., Nishikawa, S., Hamabe, A., Hasegawa, S., Ogawa, H., Fukusumi, T., Noguchi, Y., Osaki, M., Kudo, T., Sakai, D., Satoh, T., Ishii, M., Mori, M., Doki, Y.
  • 雑誌名: Oncol lett. 巻: 55 ページ: 309-318
  • 査読あり
• [雑誌論文] Eradication of therapy-resistant cancer cells in gastrointestinal organs. (Review) Molecular and Clinical Oncology. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nishikawa, S., Konno, M., Hamabe, A., Hasegawa, S., Ogawa, H., Kano, Y., Fukusumi, T., Ohta, K., Noguchi, Y., Ozaki, M., Kudo, T., Sakai, D., Haraguchi, N., Satoh, T., Doki, Y., Mori, M., Ishii, H.
  • 雑誌名: Mol Clin Oncol. 巻: 1 ページ: 15-17
  • DOI: 10.3892/mco.2012.13
  • 査読あり
• [雑誌論文] Significance of INHBA expression in human colorectal cancer. (2013)
  • 著者名/発表者名: Okano, M., Yamamoto, H., Ohkuma, H., Kano, Y., Kim, H., Nishikawa, S., Konno, M., Kawamoto, K., Haraguchi, N., Takemasa, I., Mizushima, T., Ikeda, M., Yokobori, T., Mimori, K., Sekimoto, M., Doki, Y., Mori, M., Ishii, H.
  • 雑誌名: Oncol Rep. 巻: 30 ページ: 2903-2908
  • DOI: 10.3892/or.2013.2761
  • 査読あり
• [雑誌論文] CD90 (Thy-1)-high selection enhances reprograming capacity of murine adipose-derived stem cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kawamoto, K., Konno, M., Nagano, H., Nishikawa, S., Tomimaru, Y., Akita, H., Hama, N., Wada, H., Kobayashi, S., Eguchi, H., Ito, T., Doki, Y., Mori, M., Ishii, H.
  • 雑誌名: Dis Markers. 巻: 35 ページ: 573-579
  • DOI: 10.1155/2013/392578.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cancer stem cells depend on their own niche. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kano, Y., Ishii, H., Konno, M., Ohta, K., Nishikawa, S., Fukusumi, T., Hamabe, A., Hasegawa, S., Ogawa, H., Ozaki, M., Noguchi, Y., Sakai, D., Haraguchi, N., Kudo, T., Satoh, T., Doki, Y., Mori, M.
  • 雑誌名: Gan To Kagaku Ryoho. 巻: 4 ページ: 419-423
  • 査読あり
• [雑誌論文] Innovate cell-modifying technology targeting cancer stem cell. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ishii, H., Konno, M., Kagawa, Y., Maeda, S., Ohta, K., Kano, Y., Nishikawa, S., Satoh, T., Doki, Y., Mori, M.
  • 雑誌名: Rinsho Ketsueki. 巻: 5 ページ: 415-422
  • DOI: 10.11406/rinketsu.54.415
  • 査読あり
• [雑誌論文] Depletion of JARID1B induces cellular senescence in human colorectal cancer. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ohta, K., Haraguchi, N., Nishikawa, S., Kano,Y., Kagawa, Y., Konno, M., Hamabe, A., Hasegawa, S., Ogawa, H., Fukusumi, T., Noguchi, Y., Ozaki, M., Kudo, T., Sakai, D., Satoh, T., Ishii, M., Yamamoto, H., Doki, Y., Mori, M., Ishii, H.
  • 雑誌名: International Journal of Oncology 巻: 42 ページ: 1212-1218
  • DOI: 10.3892/ijo.2013.1799.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells and Regenerative Medicine (2013)
  • 著者名/発表者名: Konno, M., Hamabe, A., Hasegawa, S., Ogawa, H., Fukusumi, T., Nishikawa, S., Ohta, K., Kano, Y., Ozaki, M., Noguchi, Y., Sakai, D., Kudoh, K., Satoh, S., Doki, Y., Mori, M., Ishii, I.
  • 雑誌名: Dev Growth Differ. 巻: 55 ページ: 309-318
  • DOI: 10.1111/dgd.12049.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Aldehyde dehydrogenasehigh gastric cancer stem cells are resistant to chemotherapy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nishikawa, S., Konno, M., Hamabe, A., Hasegawa, S., Kano, Y., Ohta, K., Fukusumi, T., Ozaki, M., Noguchi, Y., Sakai, D., Kudo, T., Haraguchi, N., Satoh, T., Doki, Y., Mori, M., Ishii, H.
  • 雑誌名: Int J Oncol. 巻: 42 ページ: 1437-1442
  • DOI: 10.3892/ijo.2013.1837.
  • 査読あり
• [学会発表] KRASを介した大腸癌代謝でのグルタミンの重要性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 三代雅明、今野雅允、加納義浩、浜部敦史、小川久貴、長谷川慎一郎、西川晋平、工藤敏啓、佐藤太郎、山本浩文、土岐 祐一郎、 森 正樹、石井秀始
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] 癌代謝とエピジェネティクスの関連性について-Pkm2の核内移行- (2013)
  • 著者名/発表者名: 浜部敦史、今野雅允、三代雅明、小川久貴、長谷川慎一郎、工藤敏啓、坂井大介、佐藤太郎、山本浩文、土岐 祐一郎、 森 正樹、石井秀始
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] 胃癌においてCD44陽性および陰性分画に存在する癌幹細胞の研究 (2013)
  • 著者名/発表者名: 西川晋平、今野 雅允、原口直紹、加納義浩、福角隆仁、太田勝也、工藤敏啓、坂井大介、瀧口修司、佐藤太郎、森 正樹、土岐 祐一郎、石井 秀始
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] CD10(+)の頭頸部扁平上皮癌細胞は治療抵抗性であり、癌幹細胞の特質を持つ (2013)
  • 著者名/発表者名: 福角隆仁、石井秀始、今野 雅允、西川晋平、加納義浩、小川久貴、長谷川慎一郎、工藤敏啓、坂井大介、佐藤太郎、土岐 祐一郎、 森 正樹、猪原秀典
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] microRNAを用いた癌リプログラミングによる新規癌治療 (2013)
  • 著者名/発表者名: 小川久貴、今野 雅允、長谷川慎一郎、浜部敦史、西川晋平、加納義浩、福角隆仁、呉しん、宮崎進、山本 浩文、西山 伸宏、片岡 一則、小比賀 聡、土岐 祐一郎、 森 正樹、 石井 秀始
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] 革新的癌細胞修飾テクノロジーのためのiPS細胞リプログラミング (2013)
  • 著者名/発表者名: 川本弘一、永野浩昭、今野 雅允、 小川久貴、 古賀睦人、三吉範克、富丸慶人、小林省吾、江口英利、山本剛史、山本 浩文、土岐 祐一郎、 森 正樹、 石井 秀始
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] 癌幹細胞の不活化を目指した革新的マイクロRNA創薬と消化器癌治療への応用 (2013)
  • 著者名/発表者名: 今野 雅允、 小川久貴、 山本剛史、 西川 晋平、 加納 義浩、 佐藤 太郎、 山本 浩文、西山 伸宏、片岡 一則、小比賀 聡、土岐 祐一郎、 森 正樹、 石井 秀始
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] Innovative microRNA-Based Cellular Reprogramming Medicine to Exterminate of Cancer Stem Cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Masamitsu Konno, Hisataka Ogawa1, Yuichiro Doki, Masaki Mori, Hideshi Ishii
  • 学会等名: 9th International Symposium on Minimal Residual Cancer
  • 発表場所: Pullman Paris Bercy(France)
  • 年月日: 20130925-20130927
• [学会発表] 最適化核酸創薬を用いた癌幹細胞のリプログラミングと革新的な癌治療 (2013)
  • 著者名/発表者名: 今野雅允、小川久貴、尾崎みゆ希、野口裕子、土岐祐一郎、森正樹、石井秀始
  • 学会等名: 第22回日本がん転移学会学術集会・総会
  • 発表場所: ホテルブエナビスタ松本(長野）
  • 年月日: 20130711-20130712
• [学会発表] Innovative microRNA-Based Cellular Reprogramming Medicine for Extermination of Cancer Stem Cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Masamitsu Konno, Hisataka Ogawa, Tsuyoshi Yamamoto, Yuichiro Doki, Nobuhiro Nishiyama, Kazunori Kataoka, Satoshi Obika, Masaki Mori, Hideshi Ishii
  • 学会等名: The 11th Stem Cell Research Symposium
  • 発表場所: 東京大学 伊藤国際学術研究センター（東京都）
  • 年月日: 20130517-20130518
• [学会発表] Innovative Bridged Nucleic Acid (BNA)-Based Cellular Reprogramming Medicine Towards Extermination of Gastrointestinal Cancer. (2013)
  • 著者名/発表者名: Masamitsu Konno, Hideshi Ishii, Norikatsu Miyoshi, Tsuyoshi Yamamoto, Nobuhiro Nishiyama, Hisataka Ogawa, Shimpei Nishikawa, Shinichiro Hasegawa, Katsuya Ohta, Yoshihiro Kano, Takahito Fukusumi, Atsushi Hamabe, Taroh Satoh, Yuichiro Doki, Kazunori Kataoka, Satoshi Obika, Masaki Mori
  • 学会等名: American Association for Cancer Research Annual meeting 2013
  • 発表場所: Walter E. Washington Convention Center（Washington DC USA）
  • 年月日: 20130406-20130410
• [図書] SURGERY FRONTIER (2013)
  • 著者名/発表者名: 浜部敦史、今野雅允、山本浩文、土岐祐一郎、森正樹、石井秀始
  • 総ページ数: 71-78
  • 出版者: メディカルレビュー社
• [図書] 癌と化学療法 (2013)
  • 著者名/発表者名: 加納義浩、石井秀始、今野雅允、太田勝也、西川晋平、福角隆仁、浜部敦史、長谷川慎一郎、小川久貴、尾崎みゆ希、野口裕子、坂井大介、原口直紹、工藤敏啓、佐藤太郎、土岐祐一郎、森正樹
  • 総ページ数: 419-423
  • 出版者: 癌と化学療法社
• [図書] SURGERY FRONTIER (2013)
  • 著者名/発表者名: 福角隆仁、石井秀始、今野雅允、太田勝也、加納義浩、西川晋平、小川久貴、浜部敦史、長谷川慎一郎、川本弘一、坂井大介、工藤敏啓、佐藤太郎、土岐祐一郎、森正樹、猪原秀典
  • 総ページ数: 112-114
  • 出版者: メディカルレビュー社