| 研究課題/領域番号 |
24791013
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
関口 昌弘 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (50528958)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 人工抗体 |
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| 研究概要 |
人工抗体his6-(ZRaf322)2は、Ras/Rafタンパクに結合し、Ras/Raf相互間シグナル伝達を阻害し、MAP-kinaseカスケードを制御できる可能性がある。そこで、人工抗体his6-(ZRaf322)2が滑膜細胞の増殖・分化に及ぼす効果を、滑膜細胞培養系にhis6-(ZRaf322)2プラスミドを添加し、細胞内に人工抗体を発現させ、細胞増殖能や炎症性サイトカイン・炎症性ケミカルメディエーターの産生への効果を検討した。滑膜細胞培養系は、ヒト滑膜細胞株、MH7Aを用い、増殖能はMTTアッセイにて、炎症性サイトカイン・炎症性ケミカルメディエーターは、TNF-α刺激MH7A細胞の培養上清中のIL-6、PGE2、MMP-3をELISA法にて測定した。その結果、人工抗体his6-(ZRaf322)2は、MH7Aの増殖やTNF-α刺激による、IL-6、PGE2、MMP-3産生を抑制できることが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
関節リウマチの主要病態である滑膜増殖およびサイトカイン産生を人工抗体により抑制可能である可能性をin-vitroで示すことができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
人工抗体his6-(ZRaf322)2が、MH7A細胞のRas/Raf相互間シグナル伝達を阻害し、MAP-kinaseカスケードを制禦していることを、ウエスタンブロットにてERK1/2のリン酸化解析し、確認する。さらに、骨芽細胞分化系における人工抗体his6-(ZRaf322)2の効果を解析する。骨芽細胞分化系は、筋芽細胞株、C2C12を用い、BMP-2で刺激し、培養後、ALP染色と、培養上清中のオステオカルシン産生をELISA法にて測定する。この培養系にhis6-(ZRaf322)2プラスミドを添加し、細胞内に人工抗体を発現させ、骨芽細胞分化への影響を検討する。さらに、C2C12細胞のRas/Raf相互間シグナル伝達を阻害し、MAP-kinaseカスケードを制禦していることを、ウエスタンブロットにてERK1/2のリン酸化解析し、確認する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
上記の推進方策に沿って研究を遂行予定であり、研究費は種々の消耗機材、解析試薬等の購入に使用する
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