研究課題/領域番号 |
24791084
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研究機関 | 自治医科大学 |
研究代表者 |
早瀬 朋美 自治医科大学, 医学部, 助教 (50433587)
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研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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キーワード | ランゲルハンス細胞組織球症 / Toll様受容体 / BRAF / エクソーム解析 |
研究実績の概要 |
ランゲルハンス細胞組織球症(LCH)は未熟樹状細胞の性質を持つLCH細胞が異常に増殖し、組織破壊を起こす疾患である。LCHの病変部位には様々な炎症細胞が浸潤しており、患者血清では炎症性サイトカイン、ケモカインの異常高値(サイトカイン/ケモカインストーム)が認められる。そのため樹状細胞に発現し病原体を認識するToll様受容体(Toll-like receptor)が未熟樹状細胞の性質を持つLCH細胞に発現し、炎症性サイトカイン/ケモカインストームに重要な働きをしていると推定し研究を開始した。平成24年度はLCH病変におけるTLRの発現について解析し、LCH細胞ではTLR1,2,6,7,8の発現絶対量が増加し、病態形成に関与している可能性が考えられた。 平成25年度はより網羅的な情報を得るため、次世代シークエンサーを用いたタンパク質をコードする全エクソンの解析(エクソーム解析)を施行する方針とし、検体の収集を行った。LCH細胞はホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)ブロックからCD1a免疫染色陽性細胞をレーザーマイクロダイセクション(LMD)により採取することとし、LMDに最適な免疫染色を検討した。また正常細胞として、患者の末梢血検体を収集した。 平成26年度はFFPEからのDNA採取を試みたが次世代シークエンサ―で解析可能な質及び量ともに得られなかった。そのためLCH病変に関しては凍結標本を収集することとし、6検体を収集した。末梢血検体のDNAを採取し、十分量のDNAが得られた。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
平成26年度中にLCH病変のFFPEブロックからLCH細胞のDNAを採取予定だったが、質、量ともに不十分であったため、LCH病変の新鮮凍結標本を収集した。
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今後の研究の推進方策 |
LCH病変の新鮮凍結検体によるエクソーム解析を行う。同定された遺伝子変異についてFFPEブロックから得られたDNAを用いてバリデーションを行う。LCH発症に関与すると考えられた遺伝子変異について機能解析を行う。
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次年度使用額が生じた理由 |
平成26年度はFFPEからのDNA採取を試みたが次世代シークエンサ―で解析可能な質及び量ともに得られなかった。そのため次世代シークエンサ―での解析が行えず、その後に予定していたバリデーション、機能解析が行えなかった。
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次年度使用額の使用計画 |
LCH病変の新鮮凍結検体によるエクソーム解析を行う。同定された遺伝子変異についてFFPEブロックから得られたDNAを用いてバリデーションを行う。LCH発症に関与すると考えられた遺伝子変異について機能解析を行う。
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