ルミノメーターを用いた高感度迅速ＥＬＩＳＡの開発と皮膚筋炎自己抗体発見への応用

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24791150
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 澤田 昌樹 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (80467315)
• キーワード: 皮膚筋炎 / 自己抗体 / ELISA / リコンビナントタンパク

研究概要

近年同定された複数の皮膚筋炎関連自己抗体は、臨床の場で非常に有用となっているが、ごく一部の施設でしか測定できず、免疫沈降法という短時間で判定するには不向きの方法で行われている。私たちは、in vitro転写翻訳システムを用いて、cDNAを含むプラスミドの調整→市販キットによるビオチン化蛋白発現→ストレプトアビジンをコートしたプレートを用いたcaptured ELISA、といった技術的に容易に行える実験系を確立した。これはT7プロモーターを持ったベクターに入った目的とするタンパクのcDNAさえ所有していれば、1週間程度で自己抗体の特異的検索が行える画期的ともいえる方法である。
今回の研究で、新たに自己抗体の存在の有無を調べたタンパクは、約60種から成るファミリーを形成するTRIM (tripartite-motif)タンパクから選んだ。TRIMファミリーのタンパクを選択した理由はそれらが、1.すでに皮膚筋炎の自己抗原として数種が同定されていること、2.自己抗原に多く見られる構造のcoiled-coilモチーフを持つこと、3.ファミリーのタンパクは相互に複合体を形成すること、などである。今回の研究中にDM自己抗原として報告されたTRIM28と、筋肉に多く発現しており、そのタンパクをコードする遺伝子の変異が遺伝性ミオパチーの原因になっていることが判明しているTRIM32を取り上げた。結果的に自施設における皮膚筋炎100例においては、TRIM28、TRIM32に対する抗体は双方とも検出できなかった。

研究成果

• [雑誌論文] Therapy-related myelodysplastic syndrome after alkylating agents and platinum-based therapy for malignant melanoma. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nin-Asai R, Sawada M, Matsumoto T, Saito S, Yokota K, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol. 巻: 41 ページ: 178-179
  • DOI: 10.1111/1346-8138.12366.
  • 査読あり
• [雑誌論文] 大腸癌術後フォローCTにて発見された腹部脂肪織内非医原性伏針の1例 (2014)
  • 著者名/発表者名: 小林 智子, 横田 憲二, 澤田 昌樹, 松本 高明, 秋山 真志
  • 雑誌名: 皮膚科の臨床 巻: 56 ページ: 102-105
  • 査読あり
• [雑誌論文] Postoperative DAV-IFN-β therapy does not improve survival rates of stage II and stage III melanoma patients significantly. (2013)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto T, Yokota K, Sawada M, Sakakibara A, Shibata S, Yasue S, Tomita Y, Yatsuya H, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Eur Acad Dermatol Venereol 巻: 27 ページ: 1514-1520
  • DOI: 10.1111/jdv.12040
  • 査読あり
• [雑誌論文] Benefit of skin ultrasound examination in determining the area of inguinal lymph node dissection. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi T, Yokota K, Sawada M, Matsumoto T, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol. 巻: 40 ページ: 765-766
  • DOI: 10.1111/1346-8138.12236.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinicopathologic analysis of 66 Japanese thin melanomas with metastasis of sentinel or regional lymph node. (2013)
  • 著者名/発表者名: Mori M, Sugiura M, Kono M, Matsumoto T, Sawada M, Yokota K, Yasue S, Shibata S, Sakakibara A, Nakamura S, Tomita Y, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Cutan Pathol. 巻: 40 ページ: 1027-1034
  • DOI: 10.1111/cup.12222.
  • 査読あり
• [学会発表] 皮膚悪性黒色腫に対するセンチネルリンパ節生検施行後のリンパ流の変化について検討
  • 著者名/発表者名: 横田 憲二, 澤田 昌樹, 松本 高明, 秋山 真志
  • 学会等名: 第29回日本皮膚悪性腫瘍学会学術大会
  • 発表場所: 富士屋ホテル（甲府市）
• [学会発表] 臀部粉瘤より発生した有棘細胞癌の一例
  • 著者名/発表者名: 長谷川 佳恵, 横田 憲二, 河野 通浩, 澤田 昌樹, 松本 高明, 秋山 真志
  • 学会等名: 第29回日本皮膚悪性腫瘍学会学術大会
  • 発表場所: 富士屋ホテル（甲府市）