今後の研究の推進方策 |
1. てんかんミュータントELマウス由来ES細胞の細胞生物学的性質の解析 未分化ES細胞マーカー発現解析についてはアルカリフォスファターゼ活性や未分化ES細胞マーカー(Oct-3/4, Nanog, SSEA-1など)の発現を蛍光染色法等により確認する。また、核型解析は染色体分染法(Gバンド法)を用いて解析する。in vitro 分化能評価については、胚様体形成もしくは、三胚葉由来体細胞への選択的分化誘導法を用いて培養・誘導後、それぞれの細胞系譜に特有のマーカー発現をリアルタイムPCR法もしくは、蛍光染色法等により解析する。 2. 終脳由来大脳皮質及び海馬神経細胞を含む神経系細胞への分化誘導法、維持法の確立とこれら神経系細胞の機能解析及び、機能関連遺伝子の発現解析 神経発生に伴い、中枢神経系は前後軸及び背腹軸に沿って空間的な特異性を獲得するが、この領域特異化は種々の液性因子(Shh, BMPs, Wnts, FGFs, レチノイン酸等)の濃度勾配によって厳密に制御される。大脳皮質及び、海馬神経系細胞を得る為、通常のNSS法(中脳領域を高効率に誘導出来る)をこれらの液性因子を添加する等の改良を行い、終脳領域を効率よく誘導する条件を確立する。誘導した神経幹細胞から機能性神経細胞への分化・成熟化能の解析を分化・成熟化に伴うシナプス関連遺伝子群の遺伝子及びタンパク質レベルでの時間、空間的発現変化を指標に比較解析する。
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