|
前年度は、マウス膀胱上皮細胞におけるPiezo1をKDした細胞を作成して伸展実験を行い、伸展刺激時の細胞内へのCa2+流入を、Ca imaging法を用いて測定したが、本年度はPiezo1阻害薬であるGsMTX４を用いて細胞内Ca2+流入量を測定した。GsMTX4はタランチュラクモ毒から精製されたペプチドである。膀胱上皮培養細胞を作成し、Ca２＋測定用の溶液にGsMTX4をそれぞれ0ｎM、1ｎM、10ｎM、30ｎMで溶解し、細胞に伸展刺激を加えCa流入量を測定した。その結果GsMTX4 10ｎM、30ｎMでは伸展刺激時の細胞内Ca2+流入量を有意に減弱させた。
次にこのGsMTX4を用いてC57BLマウス（オス）の排尿行動の変化を確認した。我々は、マウス排尿代謝ケージを用いてマウスの排尿回数、排尿間隔、１回排尿量などを測定しているが、この排尿代謝ケージを用いて、GsMTX4腹腔内投与群と生理食塩水腹腔内投与群との排尿パラメータを比較した。その結果、排尿回数はGsMTX4投与群で有意に減少しており、また１回排尿量は有意に増加していた。またその時の１日飲水量や、１日排尿量にはそれぞれの群で有意差はなかった。さらには、GsMTX4投与後24時間が経過するとGsMTX4投与前と同程度まで排尿回数、１回排尿量は戻ることが確認できた。つまりGsMTX4はPiezo1を阻害することにより、マウスの排尿行動を変化させていること、またその効果が可逆的であることが証明された。
|
