腫瘍血管内皮細胞における特異的ｍｉＲＮＡの発現解析

2012 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 24791958
• 研究種目: 若手研究(B)
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 秋山 廣輔 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 特任助教 (10609100)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 血管新生阻害剤

研究概要

近年、癌治療において腫瘍血管を攻撃して癌を兵糧攻めにし、癌の血行性転移を抑制する目的で血管新生阻害療法が開発、実用化されてきた。腫瘍血管内皮細胞は正常血管内皮細胞と異なることを当教室では報告してきており、申請者らは、正常血管内皮と腫瘍血管内皮の分子的な違いを標的とする腫瘍血管特異的な新規血管新生阻害剤の開発が可能ではないかと考えた。申請者らは、正常血管内皮が腫瘍微小環境において異常性を獲得することを報告してきた。そのメカニズムの一つに、腫瘍細胞由来因子による正常血管内皮細胞のDNAメチル化や、ヒストン脱アセチル化などエピジェネティックな異常の関与が示唆される。近年、これらエピジェネティックな異常はmicro RNA(miRNA)とよばれる低分子RNAによって制御されることが明らかになりつつある。さらに申請者らはこれまでの研究で、腫瘍培養上清中に微小胞でつつまれた腫瘍細胞由来のmiRNAが含まれていることを明らかにしてきた。本研究は正常血管内皮細胞と比較し、腫瘍血管内皮細胞に特異的なmiRNAの発現解析を行うとともに、その標的遺伝子の同定および機能解析を行う。
H24年度は舌癌をはじめとしたヒト腫瘍細胞のヌードマウス皮下移植腫瘍塊から腫瘍血管皮細胞を、正常マウス皮膚からは正常血管内皮細胞を分離・培養した。PCR法とフローサイトメーターを用いて、分離した血管内皮の特性解析をおこなった。解析の結果、純度の高い血管内皮細胞の分離ができており、今後正常血管内皮細胞と腫瘍血管内皮細胞のmiRNAの発現解析、標的的遺伝子同定、機能解析を円滑に行う上で非常に重要な成果である。
現在、miRNA Micro Array解析用の正常血管内皮細胞と腫瘍血管内皮細胞を培養中である。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

正常皮膚、及び腫瘍組織から分離できる血管内皮細胞は非常にわずかなポピュレーションである。また分離後、順調に細胞が増殖するまで時間がかかったため。
以上の理由により、miRNA MicroArray解析をH24年度中に達成することができなかった。

今後の研究の推進方策

今後は、MicroArray解析をすすめるとともに、当初の研究計画通りに正常血管内皮と腫瘍血管内皮におけるmiRNAの発現比較、その機能解析、そして目的miRNAを標的とした血管新生阻害剤の検討をin vivoで行っていく。

次年度の研究費の使用計画

H24度に行うことができなかった①miRNA MicroArrayの解析、血管内皮細胞を用いての機能解析を進めるにあたり、②血管内皮専用培地、③標的miRNAをノックダウンするsiRNA試薬、などの消耗品に充てる予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Tumor endothelial cells acquire drug resistance in a tumor microenvironment (2013)
  • 著者名/発表者名: Hida K., Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Hida Y
  • 雑誌名: J Biochem 巻: 153 ページ: 243-249
  • DOI: 10.1093/jb/mvs152
  • 査読あり
• [雑誌論文] The F-prostaglandin receptor is a novel marker for tumor endothelial cells in renal cell carcinoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Hida Y., Kitayama K., Kawamoto T., Osawa T., Suzuki Y., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M., Hida K.
  • 雑誌名: Pathology International 巻: 63 ページ: 37-44
  • DOI: 10.1111/pin.12031.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • 著者名/発表者名: Kawamoto T., Ohga N. , Akiyama K., Hirata N., Kitahara S, Maishi N., Osawa T., Yamamoto K., Kondoh M., Shindoh M., Hida Y., Hida K.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: なし
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0034045.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Biglycan is a specific marker and an autocrine angiogenic factor of tumour endothelial cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto K. , Ohga N., Hida Y., Maishi N., Kawamoto T., Kitayama K., Akiyama K., Osawa T., Kondoh M., Matsuda K., Onodera Y., Fujie M., Kaga K., Hirano S, Shinohara N., Shindoh M., Hida K.
  • 雑誌名: British Journal of Cancer 巻: 106 ページ: 1214-1223
  • DOI: doi: 10.1038/bjc.2012.59.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prostacyclin receptor in tumor endothelial cells promotes angiogenesis in an autocrine manner (2012)
  • 著者名/発表者名: Osawa T., Ohga N. , Hida Y., Kitayama K., Akiyama K., Onodera Y., Fujie M., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M. , Hida K
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 103 ページ: 1038-1044
  • DOI: 10.1111/j.1349-7006.
  • 査読あり
• [雑誌論文] CXCR7 : A novel tumor endothelial marker in renal cell carcinoma (2012)
  • 著者名/発表者名: Maishi N., Ohga N., Hida Y., Akiyama K., Kitayama K., Osawa T., Onodera Y., Nonomura K., Shinohara N., Shindoh M., Hida K .
  • 雑誌名: Pathology International 巻: 62 ページ: 309-317
  • DOI: 10.1111/j.1440-1827.2012.02792.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Heterogeneity of Tumor Endothelial Cells: Comparison between Tumor Endothelial Cells Isolated from Highly Metastatic and Low Metastatic Tumors (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohga N., Ishikawa S., Maishi N., Akiyama K., Hida Y., Kawamoto T., Sadamoto Y., Osawa T.,Yamamoto K., Kondoh M., Ohmura H., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M., Hida K.
  • 雑誌名: American Journal of Pathology 巻: 180 ページ: 1294-1307
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2011.11.035.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Tumor endothelial cells acquire drug resistance by MDR1 upregulation via VEGF signaling in tumor microenvironment (2012)
  • 著者名/発表者名: Akiyama K., Ohga N., Hida Y., Kawamoto T., Sadamoto Y., Ishikawa S., Maishi N., Akino T., Kondoh M., Matsuda A., Inoue N., Shindoh M. and Hida K
  • 雑誌名: American Journal of Pathology 巻: 180 ページ: 1283-1293
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2011.11.029.
  • 査読あり
• [学会発表] Tumor endothelium acquires drugresistance by MDR1/P-gp upregulationand metronomic chemotherapycombined with P-gp inhibitor enhancesantiangiogenic activity in vivo (2012)
  • 著者名/発表者名: Akiyama K., Ohga N., Hida Y., Maishi N., Alam Mohammad Towfik., Kawamoto T., Omura H., Yamada K., Torii C., Sakamoto H. Matsuda A., Hida K
  • 学会等名: The 20th annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and MedicineOrganization, The 10th Korea-Japan Joint Symposium on Vascular Biology
  • 発表場所: あわぎんホール（徳島市）
  • 年月日: 20121205-20121207
• [学会発表] Characterization of stem-like tumor endothelial cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Hida K., Omura H., Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Kawamoto T., Kondoh M., Hida Y.
  • 学会等名: The 20th annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and MedicineOrganization, The 10th Korea-Japan Joint Symposium on Vascular Biology
  • 発表場所: あわぎんホール（徳島市）
  • 年月日: 20121205-20121207
• [学会発表] Hypoxia induces angiogenic factors andaneuploidy in micirovascular endothelialcells (2012)
  • 著者名/発表者名: Kondoh M., Ohga N., Akiyama K., Maishi N., Kawamoto T., Hida Y., Shindoh M., Hida K.
  • 学会等名: The 20th annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and MedicineOrganization, The 10th Korea-Japan Joint Symposium on Vascular Biology
  • 発表場所: あわぎんホール（徳島市）
  • 年月日: 20121205-20121207
• [学会発表] The role of Lysyl oxidase on proangiogenic phenotypes of tumor endothelial cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Akiyama K., Osawa T., Ohga N., Hida Y., Kitayama K., Kawamoto T., Yamamoto Y., Maishi N., Kondoh M., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M., Hida K
  • 学会等名: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • 発表場所: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • 年月日: 20120919-20120921
• [学会発表] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • 著者名/発表者名: Kawamoto T., Ohga N., Akiyama K., Hirata N., Kitahara S., Maishi N., Osawa T., Yamamoto K., Kondoh M., Shindoh M., Hida Y., Hida K
  • 学会等名: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • 発表場所: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • 年月日: 20120919-20120921
• [学会発表] Biglycan is a specific marker and an autocrine angiogenic factor of tumour endothelial cells, (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohga N. ,Yamamoto K. , Hida Y., Akiyama K., Maishi N., Kawamoto T., Kitayama K., Osawa T., Hirano S, Shinohara N., Shindoh M
  • 学会等名: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • 発表場所: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • 年月日: 20120919-20120921
• [学会発表] The role of tumor endothelial cells in tumor metastasis (2012)
  • 著者名/発表者名: Maishi N., Ohba Y., Ohga N., Akiyama K., Yamamoto Y., Hamada J., Kawamoto T., Osawa T., Kondoh M., Omura H., Shindoh M., Hida Y., Hida K
  • 学会等名: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • 発表場所: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • 年月日: 20120919-20120921
• [学会発表] Characterization of Aldehyde dehydrogenase(ALDH) positive tumor endothelial cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Omura H., Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Hida Y., Kawamoto T., Kondoh M., Osawa T., Yamamoto Y., Iida J., Shindoh M., Hida K
  • 学会等名: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • 発表場所: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • 年月日: 20120919-20120921
• [学会発表] 腫瘍血管内皮細胞のプロスタサイクリン受容体は血管新生をオートクラインに促進する (2012)
  • 著者名/発表者名: 土屋邦彦、大澤崇宏、大賀則孝、樋田泰浩、北山和子、秋山廣輔、小野寺雄一郎、篠原信雄、藤江学、進藤正信、野々村克也、樋田京子
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • 年月日: 20120919-20120921
• [学会発表] 腫瘍血管内皮細胞のがん転移への関わり (2012)
  • 著者名/発表者名: 間石奈湖、大場雄介、山本和幸、大賀則孝、浜田淳一、秋山廣輔、川本泰輔、大澤崇宏、近藤美弥子、大村瞳、樋田泰浩、樋田京子
  • 学会等名: 第21回日本がん転移学会学術集会・総会
  • 発表場所: オリエンタルホテル広島（広島市）
  • 年月日: 20120712-20120713
• [学会発表] 腫瘍血管内皮細胞におけるALDHの発現解析とALDH高活性血管内皮細胞の特性解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大村瞳、大賀則孝、樋田泰浩、秋山廣輔、間石奈湖、近藤美弥子、大澤崇宏、山本和幸、川本泰輔、飯田順一郎、進藤正信、樋田京子
  • 学会等名: 第21回日本がん転移学会学術集会・総会
  • 発表場所: オリエンタルホテル広島（広島市）
  • 年月日: 20120712-20120713
• [学会発表] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • 著者名/発表者名: 川本泰輔、大賀則孝、秋山廣輔、間石奈湖、大澤崇宏、山本和幸、近藤美弥子、進藤正信、樋田泰浩、樋田京子
  • 学会等名: 第28回日本DDS学会学術集会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（札幌市）
  • 年月日: 20120704-20120706
• [学会発表] 転移能の異なる腫瘍由来の血管内皮の特性解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大賀則孝、石川修平、樋田泰浩、秋山廣輔、間石奈湖、川本泰輔、進藤正信、樋田京子
  • 学会等名: 第28回日本DDS学会学術集会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（札幌市）
  • 年月日: 20120704-20120706
• [学会発表] Biglycan is a specific marker and an autocrine angiogenic factor of tumor endothelial cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto K., Ohga N., Hida Y., Maishi N., Kawamoto T., Kitayama K., Akiyama K., Osawa T., Kondoh M., Kaga K., Shinohara N., Shindoh M., Hirano S., Hida K.
  • 学会等名: the 17th International Vascular Biology Meeting
  • 発表場所: Rein-Main-Hallen(Wiesbaden, Germany）
  • 年月日: 20120602-20120605
• [学会発表] Tumor endothelial cell s acquire drug resistance by MDR1 upregulation (2012)
  • 著者名/発表者名: Hida K., Akiyama K., Ohga N., Hida Y., Kawamoto T., Sadamoto Y., Maishi N., Akino T., Kondoh M., Shindoh M
  • 学会等名: the 17th International Vascular Biology Meeting
  • 発表場所: Rein-Main-Hallen(Wiesbaden, Germany）
  • 年月日: 20120602-20120605
• [学会発表] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • 著者名/発表者名: Kawamoto T., Ohga N., Akiyama K., Hirata N., Kitahara S., Maishi N., Osawa T., Yamamoto K., Kondoh M., Shindoh M., Hida Y., Hida K
  • 学会等名: the 17th International Vascular Biology Meeting
  • 発表場所: Rein-Main-Hallen(Wiesbaden, Germany)
  • 年月日: 20120602-20120605
• [学会発表] 腫瘍微小環境におけるVEGFシグナルを介したMDR1の発現亢進による血管内皮細胞の薬剤抵抗性獲得について (2012)
  • 著者名/発表者名: 秋山廣輔、大賀則孝、樋田泰浩、川本泰輔、定本圭弘、石川修平、間石奈湖、秋野文臣、近藤美弥子、松田彩、井上農夫男、進藤正信、樋田京子
  • 学会等名: 第66回日本口腔科学会学術集会
  • 発表場所: 広島国際会議場（広島市）
  • 年月日: 20120517-20120518
• [学会発表] 腫瘍微小 環境におけるVEGFシグナルを介したMDR1の発現亢進による血管内皮細胞の薬剤抵抗性獲得について (2012)
  • 著者名/発表者名: 秋山廣輔、大賀則孝、樋田泰浩、川本泰輔、定本圭弘、石川修平、近藤美弥子、間石奈湖、大澤崇宏、山本和幸、進藤正信、樋田京子
  • 学会等名: 第101回日本病理学会総会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都）
  • 年月日: 20120426-20120428