脱メチル化酵素ＡＩＤによる慢性ウイルス感染再活性化の検討

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24890075
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 若江 亨祥 金沢大学, 医学系, 助教 (70638303)
• 研究期間 (年度): 2012-08-31 – 2014-03-31
• キーワード: AID/APOBEC / HBV / 脱メチル化 / 慢性感染 / B型肝炎再活性化

研究概要

本研究はAID/APOBECのヒトB型肝炎ウイルス(HBV) のcovalently-closed-circular DNA (cccDNA) に対するDNA脱メチル化活性の検討を目的とした。cccDNAの検出にあたり、サザンブロット法にかわり環状DNAを特異的に増幅するRolling Circular Ampification (RCA)を立ち上げ、実際にHBV全長ゲノムが挿入されたヒト肝細胞株から検出できる事を確認した。
ヒトB型肝炎ウイルスの代替モデルとして、より1細胞あたりのcccDNAコピー数の多いDuck Hepatitis B Virus (DHBV)ゲノムを安定発現したニワトリ肝細胞株を用いた。cccDNA選択的バイサルファイトPCR法を用いて評価した結果、APOBEC3Gの異所性発現によりメチル化の減少を認め、APOBEC3がcccDNAのメチル化を抑制している事が示唆された。
AID/APOBECがHBVゲノムを脱メチル化するという作業仮説をヒトパピローマウイルス(HPV)にも演繹した。持続感染が成立した子宮頸部及び皮膚の基底細胞では、HPVゲノムはHBV同様環状二本鎖DNAとして存在する。HPV16陽性細胞株であるW12を用いてAPOBEC3A及び3Gを強制発現したところ、Long Control Region(LCR)のメチル化の低下を認めた。HBVと同様にAPOBEC3がHPVゲノムのメチル化を抑制している可能性が示唆された。

現在までの達成度 (区分)

理由

25年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

25年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] APOBEC3 deaminases induce hypermutation in human papillomavirus 16 DNA upon beta interferon stimulation. (2014)
  • 著者名/発表者名: Wang Z, Wakae K, Kitamura K, Aoyama S, Liu G, Koura M, Monjurul AM, Kukimoto I, Muramatsu M.
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 88 ページ: 1308-1317
  • DOI: 10.1128/JVI.03091-13.
  • 査読あり
• [学会発表] APOBEC3 hypermutates human papillomavirus (HPV) 16 genome (2013)
  • 著者名/発表者名: Kousho Wakae, Satoru Aoyama, Wang Zhe, Liu Guangyan, Ahsan Monjurul, Mieko Imayasu, Miki Koura, Kouichi Kitamura, Mitsuhiro Nakamura, Satoru Kyo, Satoru Kondo, Tomokazu Yoshizaki, Iwao Kukinmoto, Tomoaki Nishiyama, Masamichi Muramatsu
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸国際会議場・神戸国際展示場・神戸ポートピアホテル
  • 年月日: 20131203-20131206
• [学会発表] APOBEC3はHPVゲノムに hypermutationを導入する (2013)
  • 著者名/発表者名: 若江 亨祥, 青山 慧, 王 哲, 喜多村 晃一, 劉 光炎, アハサン=モハメド=モンジュルル, 中村 充宏, 京 哲, 柊元 巌, 西山 智明, 村松 正道
  • 学会等名: NGS現場の会・第三回研究会
  • 発表場所: 神戸国際会議場
  • 年月日: 20130904-20130905
• [学会発表] APOBEC3はHPVゲノムに hypermutationを導入する (2013)
  • 著者名/発表者名: 若江 亨祥
  • 学会等名: 第31回生化学会 北陸支部大会
  • 発表場所: 金沢大学角間キャンパス
  • 年月日: 20130525-20130525