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2013 年度 実績報告書

Nup88の分子間相互作用解析によるがん発症・転移促進機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 24890288
研究機関崇城大学

研究代表者

牧瀬 正樹  崇城大学, 薬学部, 准教授 (80433001)

研究期間 (年度) 2012-08-31 – 2014-03-31
キーワードNup88 / 核膜孔 / ビメンチン
研究概要

前年度に確立したNup88-GFP発現細胞の抽出液を用いる免疫沈降法を主な実験方法として、Nup88に結合する因子の探索とその結合様式の解析を行った。まず、Nup88と結合する因子を網羅的に探索するために、Nup88-GFP発現細胞からGFPをターゲットとして免疫沈降を行い、SDS-PAGEで分離後、質量分析装置に供して、ビメンチン、αアクチン、GAPDH、HSC70を結合の候補因子として同定した。このうち再現性が得られたビメンチンとの結合に関して、ビメンチンの欠損変異蛋白質とNup88-GFPとの結合を同様の方法で解析し、ビメンチンの脱重合に関わるN末端領域付近にNup88が結合することを示唆した。一方、Nup88側のビメンチン結合領域は同定できなかった。また、プロテオーム解析からNup88との結合が示唆されていたCD82に関して、CD82を細胞に過剰発現させて両者の結合を免疫沈降法によって解析したが、結果として特異的な結合は見出せなかった。以上から、ビメンチンとNup88の関係性に焦点を絞って解析を行った。まず、Nup88の細胞内発現に与えるビメンチンの影響を調べたが、ビメンチンを過剰発現させた細胞においてNup88の発現量は変化しなかった。次に、ビメンチンを発現していない上皮様細胞(MCF-7細胞)と発現している間葉様細胞(MDA-MB-231細胞)におけるNup88の発現量を比較したところ、MCF-7細胞においてむしろNup88の発現量が多い傾向が見られた。

現在までの達成度 (区分)
理由

25年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

25年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2014 その他

すべて 学会発表 (4件)

  • [学会発表] Hybrid peptide tat-RAM13 induces a tumor-selective necrosis-like cell death in human leukemic cells2014

    • 著者名/発表者名
      Akihiko Kuniyasu, Hayato Sakaguchi, Masaki Makise, Hitoshi Nakayama
    • 学会等名
      The 2nd EACR Conference on Cell Death in Cancer
    • 発表場所
      Amsterdam, The Neatherlands
    • 年月日
      20140130-20140201
  • [学会発表] The Nup153-Nup50 protein interface and its role in nuclear import

    • 著者名/発表者名
      Masaki Makise, Akihiko Kuniyasu
    • 学会等名
      第86回日本生化学会大会
    • 発表場所
      横浜・パシフィコ横浜
  • [学会発表] 核膜孔因子Nup50とNup153の相互作用とその核内輸送への役割

    • 著者名/発表者名
      牧瀬正樹、福永晃右、猿渡康宏、國安明彦
    • 学会等名
      日本薬学会第134年会
    • 発表場所
      熊本・熊本市総合体育館
  • [学会発表] ハイブリッドペプチドによる白血病細胞選択的ネクローシス様細胞死の誘導

    • 著者名/発表者名
      國安明彦、坂口隼、藤川典子、牧瀬正樹
    • 学会等名
      日本薬学会第134年会
    • 発表場所
      熊本・熊本市総合体育館

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公開日: 2015-05-28  

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