| 研究課題/領域番号 |
25242067
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| 研究機関 | 静岡県立大学 |
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研究代表者 |
野口 博司 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (60126141)
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| 研究分担者 |
森田 洋行 富山大学, 和漢医薬学総合研究所, 教授 (20416663)
梅原 薫 静岡県立大学, 薬学部, 講師 (40185070)
渡辺 賢二 静岡県立大学, 薬学部, 准教授 (50360938)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | ポリケタイド / 閉環酵素 / X線結晶構造解析 / 酵素工学 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度の研究において、我々は、アサ由来オリベトール酸閉環酵素（OAC）とその生成物であるオリベトール酸との複合体X線結晶構造の解析と変異導入実験から、Tyr72とHis78がOACの触媒残基である可能性を示した。本年度は、OACの基質特異性と触媒機構のさらなる解析を目的に、Tyr72F変異酵素とHis78S変異酵素のX線結晶構造解析を行った。その結果、これらの変異酵素においては、変異の導入により、野生型で見られていたTyr72とHis78の水素結合は消失する一方で、他のアミノ酸残基の立体構造は、野生型とほぼ同一に保持されていることが示された。これらのことから、OACは、Tyr72とHis78を触媒残基として閉環反応を触媒していることが強く示唆された。また、OACの活性中心キャビティー内に見いだした疎水性に富んだペンチル結合ポケットを形成するアミノ酸残基を嵩高いアミノ酸に置換したところ、酵素活性が減弱することを明らかにした。これらの変異酵素についてX線結晶構造解析を行った結果、変異の導入によりペンチル結合ポケットの容積が減少し、基質が結合しにくくなったため、酵素活性を減弱することが明らかとなった。このことから、ペンチル結合ポケットは、基質のペンチル基の結合に重要であることが示唆された。上記解析結果に基づき、OACの反応メカニズムを提唱するに至り、これらの結果を2報の論文として印刷公表した。
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| 現在までの達成度 (段落) |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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