| 研究課題/領域番号 |
25252060
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| 研究機関 | 独立行政法人農業生物資源研究所 |
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研究代表者 |
黄川田 隆洋 国立研究開発法人農業生物資源研究所, 昆虫機能研究開発ユニット, 主任研究員 (60414900)
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| 研究分担者 |
山本 卓 広島大学, 理学(系)研究科(研究院), 教授 (90244102)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | ゲノム編集 / 乾燥耐性 |
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| 研究実績の概要 |
ネムリユスリカで作動するゲノム編集技術開発を目的とした課題である。これまでの研究で、Cas9タンパク質の発現が極めて少ないことが、実験上のボトルネックになっていた。ネムリユスリカ培養細胞Pv11のトランスクリプトーム解析を行った結果、Pv.00443遺伝子が最も発現量が高いことを見いだした。Pv.00443遺伝子の5'上流1.3kbをプロモーターとする発現ベクターを構築し、Cas9遺伝子を組み込み、Pv11細胞に遺伝子導入したところ、効率良く発現することが明らかとなった。ガイドRNA発現の効率あげると期待されるPvU6b snRNA遺伝子のpol III型プロモーターもクローニング出来た。今後、ネムリユスリカ用にカスタマイズしたCRISPRシステムを用いて、Pv11細胞及びネムリユスリカ幼虫のゲノム編集を進めていき、28年度中に完成させたい。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
未だCRISPRシステムが構築できてない点は憂慮される。ただ、Cas9タンパク質の発現系がようやく構築できたことから、次年度でのシステム構築はかなりの確度で期待できる。
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| 今後の研究の推進方策 |
Cas9発現ベクターの導入と、ガイドRNA発現システム及びRNAのダイレクト導入の双方を試すことで、ネムリユスリカ用のCRISPRシステムを構築させる。構築できた場合は、ゲノム計画の結果明らかとなった乾燥耐性関連遺伝子の機能破壊及び機能抑制を行って、これら遺伝子機能と乾燥耐性との因果関係を明らかにしたい。
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