| 研究課題/領域番号 |
25253104
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
吉江 弘正 新潟大学, 医歯学系, 教授 (20143787)
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| 研究分担者 |
高柴 正悟 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (50226768)
永田 俊彦 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (10127847)
野口 俊英 愛知学院大学, 歯学部, 教授 (50014262) [辞退]
小林 哲夫 新潟大学, 医歯学総合病院, 准教授 (00215344)
前田 博史 大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (00274001) [辞退]
木戸 淳一 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 准教授 (10195315)
石原 裕一 松本歯科大学, 歯学部, 教授 (50261011)
三谷 章雄 愛知学院大学, 歯学部, 教授 (50329611)
大森 一弘 岡山大学, 大学病院, 講師 (20549860)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | サイトカイン遺伝子 / 歯周炎 / 糖尿病 / 関節リウマチ |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、歯周炎、糖尿病（DM）、関節リウマチ（RA）に共通するリスクサイトカイン遺伝子を特定して、in vitro・マウスモデル機能解析により共通発症機序を解明することである。
本年度は、参加研究施設全体での倫理委員会承認の遅延のため対象者数の確保が計画目標を下回り、歯周炎７名、DM８名、RA200名、健常38名であった。リスクサイトカイン遺伝子の臨床的評価として、17遺伝子多型（IL-1A+4845, IL-1B -31/+3954, TNF-a61537; -863/-857, IL-6-572, STAT 3の５多型、PTPN22の２多型、PADI4の３多型、KCNQ1多型）については、健常者由来DNAを対象にTaqMan Genotypingを用いたタイピングの条件設定がほぼ完了し、本実験に向けた準備が整いつつある。腫瘍壊死因子(TNF)-alpha遺伝子のメチル化状態をRA 30名、健常群30名を対象に解析した結果、同遺伝子プロモーター領域の10 CpG部位においてメチル化を検出した。メチル化頻度は６CpG部位（-163 bp, -161 bp, -119 bp, -72 bp, -49 bp, -38 bp）において統計学的な有意差が認められた。これらの部位は転写因子結合領域に近接しており、メチル化の有無によってTNF-alpha遺伝子の発現活性に影響を及ぼす可能性が考えられる。リスクサイトカイン遺伝子の基礎的評価として、インターロイキン－１レセプターアンタゴ二スト（IL-1Ra）遺伝子欠損マウスの歯周炎疾患感受性を解析した結果、野生型マウスと比べ破骨細胞分化関連遺伝子の発現が増加しており、骨形成関連遺伝子の発現は抑制が認められた。したがって、IL-1Ra遺伝子は歯周炎の病態形成に関与することが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
各大学の倫理委員会、遺伝子倫理委員会、利益相反委員会等の承認が、多くの指摘事項により、研究計画の見直しや修正が必要となった。その結果、臨床サンプルの採取や遺伝子解析等が期間内にできず、全体の計画がやや遅延することとなった。
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| 今後の研究の推進方策 |
１）対象者の臨床検査、診断、臨床検体採取（担当：分担者全員）:各大学病院にて、歯周炎のみ罹患した患者200名、糖尿病・関節リウマチと診断され歯周炎にも罹患した患者各200名、内科疾患の無い年齢・性別比がマッチした歯周状態健常者200名を対象に、歯周検査および末梢血液採取を行う。３疾患との関連性が示唆されている炎症性サイトカインと関連レセプター多型のインベーダーオリゴ・シグナルプローブを用いてインベーダー法にて遺伝子型を決定する。
２）ゲノムDNAをバイサルファイト処理後、IL-6・TNFプロモーター領域のプライマーを用いてバイサルファイト・シークエンス法にてメチル化判定およびメチル化強度を算定する（担当：新潟大学）。
３）ヒト歯肉線維芽細胞におけるIL-6発現をsiRNAを用いてノックダウンし、炎症に関連した因子や酸化ストレスマーカーなどの検討によりIL-6のリスクサイトカインの可能性を検討する（担当：徳島大学）。
４）Porphyromonas gingivalisのpeptidylarginine deiminases遺伝子ならびにenolase遺伝子に特異的なプライマーを設計し、PCR法によって増幅し，増幅産物をクローニングベクターに組み込み、クローニングベクターによって形質転換された大腸菌のタンパク質プロファイルを調べる（担当：岡山大学）。
５）関節炎を自然発症するIL-1RaKOマウスの膝関節を歯周炎群とコントロール群で組織学的ならびに膝関節の関節液あるいは関節のホモジナイズサンプル中の炎症性メディエーター量を比較検討する（担当：愛知学院大学）。
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