| 研究課題/領域番号 |
25281022
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| 研究機関 | 国立医薬品食品衛生研究所 |
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研究代表者 |
安井 学 国立医薬品食品衛生研究所, 変異遺伝部, 主任研究官 (50435707)
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| 研究分担者 |
佐々 彰 千葉大学, 理学(系)研究科(研究院), 助教 (10738347)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | DNA付加体 / DNA損傷 / 遺伝子変異 / 遺伝子破壊 / １分子 / トキシコロジー |
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| 研究実績の概要 |
平成28年度は，突然変異誘発頻度の低いDNA付加体を使用せず，TATAMのイントロン系で比較的高い突然変異誘発頻度を示すキサンチン付加体（20.5%），および5-ブロモウラシル付加体（33.2%）を選択し，TK遺伝子のエキソン５の特定部位に導入することによってTATAMのエキソン系に適用した。その結果，双方の付加体ともに突然変異誘発頻度が抑制される傾向が見られたが，イントロン系の結果と明確な違いはなかった。本系のデメリットは，イントロン系は各クローン細胞のゲノム内に導入された付加体部位をシーケンスするが，エキソン系は付加体部位で塩基置換が起きるとTK遺伝子が復帰することで，薬剤耐性コロニーとして検出されるため，エンドポイントが異なることが挙げられる。
DNA修復遺伝子の欠損細胞の構築に関しては，XPC遺伝子の開始コドン配列を欠失させたXPC欠損細胞を分離し，紫外線照射に対して高感受性であることを確認した。これまで作製したミュータント細胞を使ったTATAMを実施し，上記のような差が得られなかった実験で有意差が得られるかどうかを今後実験する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
エキソン系において，陽性対照および陰性対照ターゲティングベクターを形質転換したときの基礎的データの取得に非常に時間がかかったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでに数種のDNA修復欠損細胞を構築した。それらの欠損細胞を用いてTATAMを行い，遺伝子変異誘発頻度をエンドポイントとして，野生株では有意差が得られなかったキサンチン付加体や5-ブロモウラシル付加体を解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
遺伝子破壊細胞を構築するために低コストなCRISPR/Cas9系を利用することになったこと，また，消耗品を割引キャンペーン期間に購入したしたこと等から，実験コストを下げることができたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
細胞生物学，および分子生物学的な実験の消耗品として使用する。
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