研究課題
基盤研究(B)
DHA (Drug-H+ Antiporter) ファミリー輸送体に関しては，多数の細菌ゲノム情報に基づき発現コンストラクトをGFP蛋白質との融合体として作成，大腸菌を用いた小スケールの発現系で発現条件の検討を行った．そして，大腸菌の膜画分を調製，界面活性剤で可溶化後，粗抽出状態でGFPの蛍光を指標としたゲル濾過クロマトグラフィーを行った．その結果，２種の系で単分散性が高い構造解析に適した系を見出すに至った．さらに，これらの系について数リットルの培地を用いた大量培養を行い，膜画分を調製，界面活性剤で可溶化後，Hisタグを用いたNiアフィニティークロマトグラフィーによる精製，プロテアーゼによるGFPの切断，ゲル濾過クロマトグラフィーによる精製を行った結果，高純度でDHA輸送体タンパク質の精製標品を得ることに成功した．現在結晶化スクリーニングを行っている．病原性細菌由来MATEに関しては，MATEの１種に関して上述同様に精製後，結晶化に成功し，大型放射光施設を使用した回折実験により回折データ収集さらには構造決定を行った． その結果，高分解能での外向き開状態の構造決定に成功した．
2: おおむね順調に進展している
細菌由来DHAとMATEに関しては予定通り計画が進んでおり，今後構造決定と輸送メカニズム解明を目指す．真核生物由来MATEに関しては，構造解析可能なレベルの量・純度・安定性を有する真核生物由来MATE 発現系の網羅的探索を進行中であり，予定通り計画が進んでいる．
細菌由来MATEに関しては，外向き開状態の構造決定には至ったが，今後はその機能解析と，細菌由来DHAの構造決定に集中する．真核生物由来MATEに関しては，今後構造解析可能な系の探索をさらに進め構造決定を目指す．
すべて 2014 2013
すべて 雑誌論文 (7件) (うち査読あり 7件) 学会発表 (4件) (うち招待講演 2件)
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