インフルエンザRNAポリメラーゼのウイルス増殖における分子制御

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25291016
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 朴 三用 横浜市立大学, 生命医科学研究科, 教授 (20291932)
• 研究分担者: 杉山 佳奈子 公益財団法人神奈川科学技術アカデミー, 革新的インフルエンザウイルス創薬プロジェクト, 研究員 (20623226) ; 浦野 健 島根大学, 医学部, 教授 (70293701)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: インフルエンザ / RNAポリメラーゼ / 抗体 / 構造解析 / 創薬

研究実績の概要

インフルエンザRNAポリメラーゼはウイルス増殖の中心的な役割を担っており、他のウイルスタンパク質と比べ変異が起こることが少ないため新規薬剤ターゲットとして注目されている。本申請者は、RNAポリメラーゼが持つ3つのサブユニット(PA, PB1, PB2)のうち、どれか１つのサブユニットでも欠けるとウイルスの増殖機構が失われる事に注目し、PA/PB1とPB1/PB2サブユニット複合体の構造解析に世界で初めて成功した（Nature, 2008; EMBO J, 2009）。その知見を基に本研究では、これらのRNAポリメラーゼの断片に結合するモノクローナル抗体を作製し、ウイルス増殖の阻害抗体の開発を行う。さらに、抗体を用いたヒト細胞内におけるウイルス増殖メカニズムの解明、および抗体とのタンパク質複合体の構造解明による抗体から医薬への創薬基盤の構築を目指す。H25年度では、RNAポリメラーゼのドメイン部分を抗原として合計５５個のモノクローナル抗体を作製し、得られた精製モノクローナル抗体と抗原タンパク質との複合体を作製し、分析用超遠心機Analytical Ultracentrifuge (AUC)により、抗原であるRNAポリメラーゼタンパク質との結合能を確認した結果、３個の抗体は抗原タンパク質と特異的に結合する抗体である事を確認出来た。今後、ウイルス増殖を阻害する抗体である事を確認する予定である。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Structure-based analysis of domain function of chitin oligosaccharide deacetylase from Vibrio parahaemolyticus. (2015)
  • 著者名/発表者名: 105.Hirano T, Sugiyama K, Sakaki Y, Hakamata W, Park SY, Nishio T.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 巻: 589(1) ページ: 145-51
  • DOI: doi: 10.1016/j.febslet.2014.11.039.
  • 査読あり
• [雑誌論文] The structure and conformational switching of Rap1B. (2015)
  • 著者名/発表者名: 106.Noguchi H, Ikegami T, Nagadoi A, Kamatari YO, Park SY, Tame JR, Unzai S.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 462(1) ページ: 46-51
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2015.04.103.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A novel 3' splice site recognition by the two zinc fingers in the U2AF small subunit. (2015)
  • 著者名/発表者名: 107.Yoshida H, Park SY, Oda T, Akiyoshi T, Sato M, Shirouzu M, Tsuda K, Kuwasako K, Unzai S, Muto Y, Urano T, Obayashi E.
  • 雑誌名: Genes Dev. 巻: 29(15) ページ: 1649-60
  • DOI: 10.1101/gad.267104.115.
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Novel Tricyclic Polyketide, Vanitaracin A, Specifically Inhibits the Entry of Hepatitis B and D Viruses by Targeting Sodium Taurocholate Cotransporting Polypeptide. (2015)
  • 著者名/発表者名: 108.Kaneko M, Watashi K, Kamisuki S, Matsunaga H, Iwamoto M, Kawai F, Ohashi H, Tsukuda S, Shimura S, Suzuki R, Aizaki H, Sugiyama M, Park SY, Ito T, Ohtani N, Sugawara F, Tanaka Y, Mizokami M, Sureau C, Wakita T.
  • 雑誌名: J Virol. 巻: 89(23) ページ: 11945-53
  • DOI: 10.1128/JVI.01855-15.
  • 査読あり
• [学会発表] Structural and functional insights into a photoactivated adenylyl cyclase (2015)
  • 著者名/発表者名: 73.Mio Ohki, Kanako Sugiyama, Fumihiro Kawai, Shigeru Matsunaga, Naoya Shibayama, Mineo Iseki, Sam-Yong Park.
  • 学会等名: 第53回日本生物物理学会
  • 発表場所: 金沢大学
  • 年月日: 2015-09-13 – 2015-09-15
• [学会発表] シアノバクテリア由来の新規光活性化アデニル酸シクラーゼ (2015)
  • 著者名/発表者名: 71.伊関峰生、二瓶悠樹、田中瞳、大木規央、杉山佳奈子、河合文啓、松永茂、高橋哲郎、朴三用
  • 学会等名: 第79回日本植物学会
  • 発表場所: 新潟コンベンションセンター
  • 年月日: 2015-09-06 – 2015-09-08
• [学会発表] The structural basis for an essential subunit interaction in influenza virus RNA polymerase. (2015)
  • 著者名/発表者名: 72.Hisashi Yoshida, Kanako Sugiyama, Mio Ohki, Sam-Yong Park.
  • 学会等名: European crystallographic meeting.
  • 発表場所: Rovinj, Croatia.
  • 年月日: 2015-08-23 – 2015-08-28
  • 国際学会
• [図書] 医学のあゆみ (2015)
  • 著者名/発表者名: 朴三用
  • 総ページ数: 551-557
  • 出版者: 医歯薬出版株式会社
• [産業財産権] インフルエンザウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼのPB2サブユニットに対するモノクローナル抗体 (2014)
  • 発明者名: 朴三用、浦野健、杉山佳奈子
  • 権利者名: 朴三用、浦野健、杉山佳奈子
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2014-068824
  • 出願年月日: 2014-03-28
  • 取得年月日: 2015-10-13