| 研究課題/領域番号 |
25291018
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| 研究機関 | 国立遺伝学研究所 |
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研究代表者 |
西野 達哉 東京理科大学, 基礎工学部, 准教授 (50533155)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 染色体分配 / X線結晶構造解析 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は真核生物の染色体分配に関わるCENP-TWSX複合体の構造と機能の解析を通じて染色体分配機構解明を目指すものである。本年度は昨年度に引き続きCENP-TWSX複合体のDNAとの複合体について生化学および結晶構造解析を行った。CENP-SXとDNAの複合体解析ではCENP-SX／DNA複合体のX線回折を測定し、位相決定を試みた。分解能約5.5オングストロームで分子置換法を行ったところ、タンパク質の電子密度を確認することができた。しかしDNAに相当するよう行きの電子密度が確認できなかった。一方、CENP-SXに結合するFANC-Mとの複合体再構成を行い、FANC-M/CENP-SXを作成することができた。FANC-M/CENP-SX複合体はCENP-SXやCENP-TWSXと異なるDNA結合特異性を有していることがわかった。FANC-M/CENP-SX複合体の結晶構造解析を行い、分解能約３オングストロームの結晶を得ることに成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
真核生物の染色体分配にかかわるCENP-TWSX複合体やCENP-SX複合体、FANC-M/CENP-SX複合体の生化学的な機構が明らかになった。結晶構造解析においてもCENP-SXとDNAの複合体結晶やFANC-M/CENP-SX複合体の結晶を得ることに成功した。今後はDNAの電子密度を精密化するべく位相改善を行っていく予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後はCENP-SXとDNAのみならずCENP-TWSX複合体DNAの認識機構解明を目指す。この目的においては変異体解析を通じた詳細な認識機構を踏まえて行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成27年度中に当初の計画に沿って実験結果をまとめる予定であったが、蛋白質複合体の立体構造解析、特に蛋白質複合体結晶の高分解能X線構造解析に想定外に時間がかかっているため、未使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
蛋白質複合体を大量調整し、構造解析を加速するため、高速遠心装置及び試料調整用のアフィニティー精製カラムなどに充てることとしたい。
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