| 研究実績の概要 |
Mst1およびMst2欠損T細胞の免疫シナプス形成を調べた結果、cSMAC(TCR/ペプチドMHC), pSMAC(LFA-1/ICAM-1)の形成が著しく障害されていた。またLFA-1/ICAM-1結合の一分子解析法を樹立し、解析した結果、高親和性結合の低下が明らかになった。リンパ球におけるHippo経路分子の発現を調べた結果、アダプター蛋白質Mob1a/Mob1b、NDR1/NDR2の発現が高いことから、Rap1シグナルによるRAPLと Mst1/Mst2によるインテグリンを介する接着、移動、抗原認識にNDR1/NDR2が関与するか検討した。RAPL、Mst1, Mob1a/Mob1b, NDR1/NDR2は複合体を形成することが免疫沈降法によってあきらかになった。RAPL/Mst1複合体とMob1/NDR1またまはNDR2の複合体の相互作用の結果、NDRカルボキシ末端のリン酸化が亢進し、Mst1によるNDRキナーゼの活性化が起こっていた。また、TCRおよびケモカイン刺激によるNDRの活性化がおこっていたが、Mst1欠損T細胞ではNDRカルボキシ末端リン酸化が低下していた。shRNAによるNDR1およびNDR2のknockdownによってケモカインによるT細胞の先端膜およびuropodの形成が障害され、接着も低下した。また、Rac/CDC42の活性化異常が起こっていた。NDRの下流ターゲット分子としてRab8交換因子Rabin8およびRab8を解析した。Crisper/Cas9によるRabin8欠損したリンパ球細胞株ではケモカインによる接着移動の異常は見られなかったが、Rab8欠損ではLFA-1の前方への集積が低下していた。
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