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植物DNAウイルスは、多種多様な農作物に感染し、現在も多大な経済的損失を与え続けているが、いまだ効果的な対処法が開発されていないのが現状である。ウイルスは、植物体内に侵入しても増殖しなければ発病しないと考えられるので、ウイルス増殖に鍵となるウイルスゲノムDNAの複製を何らかの方法で阻害することができれば、ウイルス病の発症を防ぐことが可能と考えられる。そこで本研究では、ウイルスゲノムDNAの複製を防ぐ人工DNA結合タンパク質を開発し、その遺伝子を植物に導入することにより、ウイルス耐病性を付与できるかどうかを検証する。そのため、本年度は、昨年度作成した人工DNA結合タンパク質遺伝子の植物への遺伝子導入を継続して行った。すなわち、当研究室で確立されているプロトコールにしたがって、アグロバクテリアの感染力を利用して、植物の組織切片に遺伝子発現系を導入していき、薬剤耐性にもとづいて遺伝子導入体を選抜していきながら、カルス、シュート、続いて、発根を順次誘導していった。さらに、得られた遺伝子導入体を順化し、ポットに移し、遺伝子組み換え植物を作製した。同時に、DNAウイルス感染系の構築も行った。昨年度に作製した、部分的にウイルスゲノムを有するベクターに、完全長のウイルスゲノムをクローニングし、ウイルス感染に必要なバイナリーベクターを構築した。さらに、このバイナリーベクターを用いてアグロバクテリアを形質転換した。得られた形質転換体DNAを抽出し、マッピングを行うことにより、作製したバイナリーベクターがアグロバクテリアに安定に保持されることも確認した。
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