| 研究課題/領域番号 |
25292063
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| 研究機関 | 石川県立大学 |
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研究代表者 |
山本 憲二 石川県立大学, 生物資源環境学部, 教授 (70109049)
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| 研究分担者 |
加藤 紀彦 京都大学, 生命科学研究科, 助教 (40724612)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | エンドグリコシダーゼ / 抗体医薬 / 免疫グロブリンG / コアフコース / 細胞傷害活性 / Endo-M / 部位特異的変異酵素 |
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| 研究実績の概要 |
前年度までにバイオ医薬品であるヒトIgGの糖鎖の挿げ替えについて、組換え酵母由来のヒトIgGの糖鎖をEndo-Mの部位特異的変異酵素Endo-M-N175Hとシアロオキサゾリン糖鎖を用いてヒト型糖鎖にリモデリングすることに成功している。そこで、本年度はヒトIgG糖鎖のすげ替えと応用性の拡大を諮るために、Endo-Mの基質特異性の改変を試みた。
Endo-Mは動物細胞によって生産される糖タンパク質に多く見出されるコアフコースを有する糖鎖に対しては全く加水分解活性を示さない。しかし、抗体医薬ヒトIgGのコアフコース含有糖鎖を除去すると細胞傷害活性が飛躍的に高められることが知られており、Endo-Mがこのような糖鎖に対して加水分解活性を発揮することができれば有用性が増大する。そこで、コアフコースを有する短い糖鎖（M3N2F）に対して加水分解活性を有するEndo-Dと全く活性を有しないEndo-Aの酵素タンパク質の構造比較より、コアフコースを有する糖鎖に対して作用するEndo-Mの取得を試みた。すなわち、Endo-Mと基質特異性が類似しているEndo-Aは活性中心ポケットが狭くて深い構造をしており、一方、Endo-Dは活性中心が広くて浅い。そこで、ポケットを縮めているEndo-AのW244に相当するEndo-MのW251に対する部位特異的変異酵素W251Nを作成して、マンノース３糖を結合したジアセチルキトビオースにフコースが結合したビオチン化合物（M3N2F-biotin）に作用したところ、加水分解活性を示した。得られた生成物はMALDI-TOF/MS分析によりフコシルN-アセチルグルコサミニルビオチン（FN-biotin）であることを同定した。さらに、コアフコースを有する糖鎖を持つ糖タンパク質である抗がん剤のリツキサンやヒトラクトフェリンの糖鎖をも遊離することを確認した。
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| 現在までの達成度 (段落) |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 次年度使用額の使用計画 |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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