研究課題
[全体構想] 全世界の人獣に甚大な被害を与えているのにもかかわらず、未だ有効で安全な防御・治療法が確立されていないフタトゲチマダニの新規防圧法の開発を最終目標としている。[研究目的] マダニの吸血および病原体感染防御において重要な役割を担うと考えられるToll 情報伝達経路を構成するToll 様受容体(TLR)とTRAF関連因子(TRAFD1)の同定・特性についてRNA 干渉法を用いて解明する。また、これらの組換え体や二本鎖RNAと遺伝子キャリアー複合体を作製する。すなわち、これらの組換え体に対する抗体や複合体を経口接種したマダニ体内においてTLR やTRAFD1の遺伝子・タンパク質発現阻害を誘起し、マダニの吸血・産卵の阻害効果や病原体に対する抵抗性を減弱させることが本研究の主要目的である。[今まで得られた研究成果] 発育期別のマダニおよび各吸血日数別の雌成ダニ個体とその臓器のRNAとタンパク質を抽出し、TRAFD1遺伝子とTRAFD1タンパク質の発現動態を調べた。その結果、TRAFD1の発現は吸血に伴って増大するが、飽血後数週間で著しく減少することが分かった。すなわち、TRAFD1を含むシグナル経路は吸血によって活性化されるが、その活性は飽血後数週間で失われる可能性が考えられた。また、間接蛍光抗体法によりTRAFD1はマダニの唾液腺、中腸、卵巣の細胞膜付近に局在していることが分かった。さらに、TRAFD1遺伝子をノックダウンすると、成ダニの吸血および産卵数に影響はないが、マダニの自然免疫関連分子であるディフェンシン様分子の発現が抑制された。以上の結果より、TRAFD1はマダニの吸血や産卵には影響しないが、マダニの自然免疫系を制御する重要な分子である可能性が考えられた。[成果と意義] これらの研究成果より、TRAFD1を標的とした特異性と有効性に優れたマダニ防圧法のワクチンや遺伝子治療技術の開発の可能性を世界に先駆けて示すことが出来る。
2: おおむね順調に進展している
Toll情報伝達経路の下流を制御することが予想されるTRAF関連分子(TRAFD1)の同定・特性について解析したところ、この分子がグラム陰性菌に対する感染防御能に重要な役割を果たしていることが分かった。
平成27年度は、組換えTLRとTRAFD1を免疫し、ワクチン効果の評価を行う予定だったが、RNA干渉法によって得られたマダニ表現型の結果がコントロール群と顕著な差が認められなかった。そのため、RNA干渉法によってマダニ表現型の変化が顕著に観察された初期免疫を担う可能性があるフェリチン分子を以降の実験に用いることにした。すなわち、フェリチンに対する遺伝子・タンパク質の発現阻害効果が確認された二本鎖RNAを用いて作製した遺伝子キャリアー複合体を、実験的にウサギに接種し、これを経口接種したマダニ体内におけるin vivo RNAiの誘起をマダニに対する傷害・殺滅の効果と合わせて検証する。最終目標として、フタトゲチマダニ体内のフェリチンに対する抗体、フェリチンのRNA干渉法と、これに基づくマダニ殺滅とマダニ媒介性病原体の阻止を実現し、世界初のフタトゲチマダニのワクチンと遺伝子治療法の開発につなげる。
平成26年度は物品費として分子生物学用消耗品として大量の経費を使用する予定だったが、物品購入費を節約したため、平成27年度に持ち越すことができた。
平成27年度の予算使用計画は分子生物学用消耗品が主であり、その他、研究打ち合わせ・研究成果発表のための旅費、人件費・謝金、論文投稿料として使用する予定である。
すべて 2015 2014 その他
すべて 雑誌論文 (6件) (うち査読あり 6件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (14件) (うち招待講演 1件) 図書 (2件) 備考 (1件)
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