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2015 年度 実績報告書

PPRコードを利用した細胞質雄性不稔の稔性回復因子の同定と創成

研究課題

研究課題/領域番号 25292219
研究機関九州大学

研究代表者

中村 崇裕  九州大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (10464398)

研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2016-03-31
キーワード細胞質雄性不稔 / ゲノム編集
研究実績の概要

(1) Rfとして働く天然型PPR蛋白質の予測と同定
(a) 様々なアミノ酸多型を持つRf様遺伝子の機能検定 H27年度は、これまでのオグラ型細胞質ダイコンRf遺伝子の機能性の予測値と実測値についての解析を行った。予測プログラムへの反映を行った。
(b) 未同定Rf遺伝子の同定  遺伝学的に優性のRf遺伝子として働くことが明らかになったPPR遺伝子について、ミトコンドリアorf352遺伝子mRNAとの結合を生化学的に検証した。具体的には、当該PPRの組換えタンパク質をコムギ胚芽無細胞系により調製し、ゲルシフト法、アルファスクリーン方などの生化学的な手法で、orf352遺伝子mRNAとの結合を検証した。
(2) PPR蛋白質の改変によるカスタムRfの創出
BT型細胞質不稔イネのCMS遺伝子であるorf79に特異的に作用し、編集(C→Uへの変換)することで、タンパク質コード領域に新たな翻訳終止コドンを形成し、CMS遺伝子の発現を阻害する分子ツールの開発を行った。動物培養細胞で当該分子ツールの検証を行った。具体的には複数個のPPRモチーフを人工的に連結することで、目的とするカスタムPPR分子を設計し、全遺伝子合成により目的DNA断片を得た。設計したPPR分子の配列特異的なRNA結合能を動物培養細胞で検証した。目的とする性質が検証できたPPR分子にRNA編集を補助するエフェクタードメインを連結し、解析に用いた。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

27年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2016 2015

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 オープンアクセス 3件、 謝辞記載あり 1件)

  • [雑誌論文] Mitochondrial ORF79 levels determine pollen abortion in cytoplasmic male sterile rice.2016

    • 著者名/発表者名
      Kazama T, Itabashi E, Fujii S, Nakamura T, Toriyama K.
    • 雑誌名

      Plant J.

      巻: 85 ページ: 707-16

    • DOI

      10.1111/tpj.13135.

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Challenges of EditForce Inc., to go beyond genome editing.2015

    • 著者名/発表者名
      Yagi, Y., Shirakwa, M. & Nakamura, T.
    • 雑誌名

      Nature

      巻: 528 ページ: Sponsors feat.

    • DOI

      none

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Homologous recombination-independent large gene cassette knock-in in CHO cells using TALEN and MMEJ-directed donor plasmids.2015

    • 著者名/発表者名
      Sakuma, T., Takenaga, M., Kawabe, Y., Nakamura, T., Kamihira, M. & Yamamoto, T.
    • 雑誌名

      Int. J. Mol. Sci.

      巻: 16 ページ: 23849-23866

    • DOI

      10.3390/ijms161023849

    • 査読あり / オープンアクセス

URL: 

公開日: 2017-01-06  

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