研究課題
基盤研究(B)
①脊髄小脳変性症14型（SCA14）の原因タンパク質である変異γPKCの凝集体形成と細胞毒性と分子シャペロンである熱ショックタンパク質HSP70との関連を解析した。神経系の培養細胞であるSH-SY5Y細胞に変異γPKCを発現させたところ、HSP70の発現は上昇し、siRNAでHSP70をノックダウンすると、変異γPKCの凝集体形成は増加し細胞毒性も上昇した。この結果からHSP70はSCA14変異γPKCの凝集体形成を抑制し、細胞毒性を阻害する役割を持つことが明らかとなり、HSP70はSCA14の治療標的であることが示唆された （BBRC 2013 440 : 25-30）②脊髄小脳変性症14型（SCA14）の原因タンパク質である変異γPKCがどのような機序で神経細胞死や樹状突起の発育不良を引き起こすか、その分子機序を解析した。細胞内のγPKCはその活性化薬であるフォルボールエステルのTPAを処置すると、一旦、細胞膜に移動した後、マクロピノサイトーシスにより核近くに凝集する。しかしながら、SCA14変異γPKCでは、TPAで処置してもそのような現象が見られないことが明らかとなった。また、変異γPKCはマクロピノサイトーシスに重要なMARCKSのリン酸化を引き起こさないことがわかり、そのことがTPAによるマクロピノサイトーシス惹起を阻害する一因になることが解った。SCA14の発症原因にマクロピノサイトーシスの制御不全の関与が示唆された。(Frontiers in Physiology (2014)5: 126.)③セロトニントランスポーター(SERT)のC末端欠損体(SERT ΔCT)は、小胞体に停留し凝集体を形成することがわかった。この凝集体は4-PBAなどのケミカルシャペロンで減少することが示されたので、SERTΔCTの凝集体形成を指標に膜輸送活性化物質を検索することが可能となった。
3: やや遅れている
セロトニントランスポーター(SERT)のC末端欠損体(SERT ΔCT)を用いた新たな評価方法の開発の可能性が明らかになり、SERTを持ちいた検索法の開発には進展があったが、GAPDH－HTを用いたシャペロン介在性オートファジー活性評価系の開発は、誘導発現系(具体的にはTetONシステム)の調整に手間取り、十分とは言えない状況である。
誘導発現系を用いたGAPDH－HTによるャペロン介在性オートファジー活性評価系の確立をさらに推進する。SERTを用いた評価系は、糖鎖修飾を指標にしたものに合わせ、本年度開発のめどが立ったSERT ΔCTを用いた評価系の開発をさらに加速させる。
次年度使用額は生じたが、1万円以下であり、概ね計画通り研究費を使用していると判断する。物品費（消耗品購入）に使用する。
すべて 2014 2013 その他
すべて 雑誌論文 (7件) (うち査読あり 6件、 オープンアクセス 2件、 謝辞記載あり 2件) 学会発表 (17件) (うち招待講演 17件)
Frontiers in Physiology
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