歌舞伎症候群解析から広げる全ゲノム対象エピジェネティック解析法の開発

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25293084
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 吉浦 孝一郎 長崎大学, 原爆後障害医療研究所, 教授 (00304931)
• 研究分担者: 太田 亨 北海道医療大学, 個体差健康科学研究所, 教授 (10223835)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: エピジェネティクス / ヒストンメチル化 / ゲノム編集 / 変異

研究実績の概要

歌舞伎症候群の本体は，ヒストンメチル化異常によって引き起こされる病態である可能性が高く，病態解明のため，ゲノム全体を対象にしたヒストンのメチル化状態のプロファイリングを明らかにしておく必要がある。本研究では，KMT2DとKDM6Aの修飾ターゲットを探索するとともに，培養細胞での実験系構築を図る。
ゲノム編集を行い基準線維芽細胞から変異を有する細胞の構築を目指した。CRSPER/Cas9システム活用し，薬剤耐性クローン選択を行い，ピックアップした時だけ目的部位の欠失したクローンが取得出来る。初期の報告のように薬剤選択しない場合，目的クローンは取得出来ないし，donor DNAを加えての点突然変異ゲノム編集は出来ない。KMT2DとKDM6A遺伝子以外のターゲットの場合にはヒト線維芽細胞でその遺伝子欠失クローンが得られたが，KMT2DとKDM6A遺伝子遺伝子に関して，線維芽細胞からの欠失クローンを得ることは出来なかった。
ヒト標準線維芽細胞からモデル細胞をえることが難しいと判断し，モデルマウス個体の作成も本研究に取り入れた。キメラマウスが得られ，交配からES細胞由来のヘテロは得られるものの mutant allele が伝達されたヘテロ接合マウスが得られず，体外受精でキメラマウスを２匹得ることが出来た。今後の解析に利用するためにコロニー増殖中である。
KMT2DおよびKDM6A遺伝子変異陰性例（患者DNAのみ有する）については exome 解析にても原因変異は見つからず，KMT2D にはイントロンも含めて原因と思われる変異は同定できない。全国的に歌舞伎症候群の遺伝子診断を提供しながら，歌舞伎症候群患者変異陰性例の全ゲノム解析に向けての同意取得と試料取得を図り，３例のトリオを入手した。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Germline mutations causing familial lung cancer. (2015)
  • 著者名/発表者名: 1.Tomoshige K, Matsumoto K, Tsuchiya T, Oikawa M, Miyazaki T, Yamasaki N, Mishima H, Kinoshita A, Kubo T, Fukushima K, Yoshiura KI, Nagayasu T.
  • 雑誌名: Journal of Hum Genetics 巻: 60 ページ: 597-603
  • DOI: doi:10.1038/jhg.2015.75.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Novel compound heterozygous DNA ligase IV mutations in an adolescent with a slowly-progressing radiosensitive-severe combined immunodeficiency. (2015)
  • 著者名/発表者名: 2.Tamura S, Higuchi K, Tamaki M, Inoue C, Awazawa R, Mitsuki N, Nakazawa Y, Mishima H, Takahashi K, Kondo O, Imai K, Morio T, Ohara O, Ogi T, Furukawa F, Inoue M, Yoshiura KI, Kanazawa N.
  • 雑誌名: Clinical Immunology 巻: 160 ページ: 225-260
  • DOI: doi:10.1016/j.clim.2015.07.004.
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel diagnostic method targeting genomic instability in intracystic tumors of the breast. Breast Cancer. (2015)
  • 著者名/発表者名: 3.Oikawa M, Yano H, Matsumoto M, Otsubo R, Shibata K, Hayashi T, Abe K, Kinoshita N, Yoshiura KI, Nagayasu T.
  • 雑誌名: Breast Cancer 巻: 22 ページ: 529-535
  • DOI: doi:10.1007/s12282-013-0516-9.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Increased Levels of Cell-Free miR-517a and Decreased Levels of Cell-Free miR-518b in Maternal Plasma Samples From Placenta Previa Pregnancies at 32 Weeks of Gestation. (2015)
  • 著者名/発表者名: 4.Hasegawa Y, Miura K, Higashijima A, Abe S, Miura S, Yoshiura KI, Masuzaki H.
  • 雑誌名: Reproductive Sciences 巻: 22 ページ: 1569-1576
  • DOI: doi:10.1177/1933719115589407.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neonatal case of novel KMT2D mutation in Kabuki syndrome with severe hypoglycemia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Gohda Y, Oka S, Matsunaga T, Watanabe S, Yoshiura K, Kondoh T, Matsumoto T.
  • 雑誌名: Pediatric International 巻: 57 ページ: 726-728
  • DOI: doi:10.1111/ped.12574.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Pregnancy-associated microRNAs in plasma as potential molecular markers of ectopic pregnancy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Miura K, Higashijima A, Mishima H, Miura S, Kitajima M, Kaneuchi M, Yoshiura K, Masuzaki H.
  • 雑誌名: Fertility and Sterility 巻: 10 ページ: 1202-1208.el
  • DOI: doi:10.1016/j.fertnstert.2015.01.041.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Circulating levels of maternal plasma cell-free miR-21 are associated with maternal body mass index and neonatal birth weight. (2015)
  • 著者名/発表者名: Miura K, Higashijima A, Hasegawa Y, Abe S, Miura S, Kaneuchi M, Yoshiura KI, Masuzaki H.
  • 雑誌名: Prenatal Diagnosis 巻: 35 ページ: 509-511
  • DOI: doi:10.1002/pd.4509.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Autosomal recessive cystinuria caused by genome-wide paternal uniparental isodisomy in a patient with Beckwith-Wiedemann syndrome. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka Y, Higashimoto K, Sasaki K, Jozaki K, Yoshinaga H, Okamoto N, Takama Y, Kubota A, Nakayama M, Yatsuki H, Nishioka K, Joh K, Mukai T, Yoshiura KI, Soejima H.
  • 雑誌名: Clinical Genetics 巻: 88 ページ: 261-266
  • DOI: doi:10.1111/cge.12496.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of labor on plasma concentrations and postpartum clearance of cell-free, pregnancy-associated, placenta-specific microRNAs. (2015)
  • 著者名/発表者名: Morisaki S, Miura K, Higashijima A, Abe S, Miura S, Hasegawa Y, Yoshida A, Kaneuchi M, Yoshiura KI, Masuzaki H.
  • 雑誌名: Prenatal Diagnosis 巻: 35 ページ: 44-45
  • DOI: doi: 10.1002/pd.4479.
  • 査読あり
• [学会発表] 日本人における子宮頸がん発症感受性同定に関するゲノムワイド関連解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉浦孝一郎，三浦清徳，増崎英明
  • 学会等名: 第１回日本産産科婦人科 遺伝診療学会
  • 発表場所: 長崎ブリックホール（長崎県・長崎市）
  • 年月日: 2015-12-18 – 2015-12-19
  • 招待講演
• [学会発表] 間葉性異形成胎盤の分子遺伝学的解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 青木早織、東元健、樋高秀憲、渡邊英孝、大塚泰史、三嶋博之、吉浦孝一郎、八木ひとみ、西岡憲一、城圭一郎、大場隆、片渕秀隆、副島英伸
  • 学会等名: 第23回日本胎盤学会学術集会
  • 発表場所: JA共催ビル カンファレンスホール（東京都・千代田区）
  • 年月日: 2015-11-05 – 2015-11-06
• [学会発表] Droplet digital PCR を用いた鋭敏なモザイク検出法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 渡辺聡，吉浦孝一郎
  • 学会等名: 第60回日本人類遺伝学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2015-10-14 – 2015-10-17
  • 招待講演
• [学会発表] 妊娠経過に伴う母体血漿中胎盤特異的microRNA 流入量に関する検討 (2015)
  • 著者名/発表者名: 村上優子，三浦清徳，東島 愛，阿部修平，渕 直樹，長谷川ゆり，三嶋博之，木下 晃，吉浦孝一郎，増崎英明
  • 学会等名: 第60回日本人類遺伝学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2015-10-14 – 2015-10-17
• [学会発表] 間葉性異形成胎盤のゲノム・エピゲノム解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 青木早織，東元 健，樋高秀憲，渡邊英孝，大塚泰史，三嶋博之，吉浦孝一郎，八木ひとみ，西岡憲一，城 圭一郎，大場 隆，片淵秀隆，副島英伸
  • 学会等名: 第60回日本人類遺伝学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2015-10-14 – 2015-10-17
• [学会発表] 中條-西村症候群様自己炎症性疾患の変異解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 木下晃，金澤伸雄，金城紀子，三嶋博之，吉浦孝一郎
  • 学会等名: 第60回日本人類遺伝学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2015-10-14 – 2015-10-17
• [学会発表] 異所性妊娠における母胎血漿中胎盤特異的microRNA流入量の臨床的意義に関する検討 (2015)
  • 著者名/発表者名: 東島 愛，三浦清徳，長谷川ゆり，松本亜由美，北島道夫，三嶋博之，木下 晃，吉浦孝一郎，増崎英明
  • 学会等名: 第60回日本人類遺伝学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2015-10-14 – 2015-10-17
• [学会発表] Exomiser を用いたエクソーム解析フローと支援ツールの開発 (2015)
  • 著者名/発表者名: 三嶋博之，吉浦孝一郎
  • 学会等名: 第60回日本人類遺伝学会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都・新宿区）
  • 年月日: 2015-10-14 – 2015-10-17
• [学会発表] 原因不明および原因既知の疾患の解析を実施するにあたって～ゲノムからの視点 (2015)
  • 著者名/発表者名: 吉浦孝一郎
  • 学会等名: 統合データベースとオープンライフサイエンス トーゴーの日シンポジウム
  • 発表場所: 東京大学弥生講堂・一条ホール（東京都・文京区）
  • 年月日: 2015-10-05 – 2015-10-06
  • 招待講演
• [学会発表] Rare variant検出限界への挑戦：ddPCRを用いたMcCune-Albright症候群 責任遺伝子GNAS mosaic同定の試み (2015)
  • 著者名/発表者名: 渡辺 聡，吉浦孝一郎
  • 学会等名: デジタルPCR最先端テクニカルシンポジウム
  • 発表場所: 千里ライフサイエンスセンタービル（大阪府・豊中市）
  • 年月日: 2015-08-28 – 2015-08-28
• [学会発表] 日本における1q 部分重複症候群26 例の検討 (2015)
  • 著者名/発表者名: 渡辺聡、清水健司、大橋博文、小崎里華、岡本伸彦、知念安紹、水野誠司、道和百合、塩見夏子、東田好広、田代克弥、七條光市、湊崎和範、麻生誠二郎、松本正、福田雅文、吉浦孝一郎、近藤達郎
  • 学会等名: 第55回日本先天異常学会学術集会/第38回日本小児遺伝学会学術集会
  • 発表場所: パシフィコ横浜会議センター（神奈川県・横浜市）
  • 年月日: 2015-07-25 – 2015-07-27
• [学会発表] 自己炎症疾患の遺伝子解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 木下晃，吉浦 孝一郎
  • 学会等名: 平成27年度広島大学・長崎大学連携研究カンファランス
  • 発表場所: 広島大学基礎・社会医学棟2階セミナー室2（広島県・広島市）
  • 年月日: 2015-06-06 – 2015-06-06
• [図書] ゲノム医学 -ゲノム情報を活かす医療のために- (2016)
  • 著者名/発表者名: ［著］Tom Strachan［監訳］菅野純夫・福嶋義光
  • 総ページ数: 64
  • 出版者: メディカル・サイエンス・インターナショナル
• [備考] 長崎大学原爆後障害医療研究所 人類遺伝学研究分野（原研遺伝） 研究内容
  • URL: http://www-sdc.med.nagasaki-u.ac.jp/dhge/research/index.html