研究課題/領域番号 |
25293109
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研究種目 |
基盤研究(B)
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研究機関 | 名古屋大学 |
研究代表者 |
木村 宏 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30303621)
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研究分担者 |
伊藤 嘉規 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (20373491)
瀬戸 加大 愛知県がんセンター(研究所), 遺伝子医療研究部, 部長 (80154665)
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研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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キーワード | ウイルス初がん / EBウイルス / 遺伝子解析 |
研究概要 |
アレイCGH法により、種痘様水疱症関連リンパ腫に共通する遺伝子欠損・増幅の同定を試みた。対象は名古屋大学医学部附属病院に入院・通院している種痘様水疱症関連リンパ腫患者4例。患者より末梢血を採取、単核球分離後、EBV感染細胞を分画した。EBV陽性腫瘍細胞分画・陰性正常細胞分画からそれぞれDNAを抽出し、腫瘍DNAをCy3、正常DNAをCy5で標識後、400,000個のオリゴヌクレオチドプローブをスポットしたスライドグラス上でハイブリダイゼーションを行った。蛍光をアレイスキャナーで読みとり、専用ソフトウェアにより欠損/増幅している遺伝子領域を検出した。次いで、患者に共通して欠損・重複・転座している遺伝子領域を同定した。この結果、種痘様水疱症関連リンパ腫患者例に対して複数の共通する遺伝子欠損・増幅領域を見出した。解析したすべての患者で欠損していた遺伝子Xは、これまでの文献報告から推定される機能と併せ、がん抑制遺伝子である可能性がある。また、全ての患者で増幅が見られた遺伝子座17q21.3にはリンパ球のhomingに関連する遺伝子が含まれており、種痘様水疱症関連リンパ腫に見られる特徴的な水疱疹形成・腫瘍の転移に関与している可能性が示唆された。同時に患者から樹立したEBV感染T細胞株3株に対してもアレイCGHを行い、これらの遺伝子欠損・増幅を確認した。更に、候補遺伝子の発現量を解析するために、患者のEBV感染細胞、非感染細胞、EBV感染T細胞株からRNAを抽出、マイクロアレイ法により、網羅的遺伝子発現解析を行った。責任候補遺伝子であるX遺伝子の発現は様々であり、一定の傾向は得られなかった。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
初年度の目標であった、「アレイCGH法により、種痘様水疱症関連リンパ腫に共通する遺伝子欠損・増幅を同定し、さらにシークエンシング、RT-PCR法などにより候補遺伝子の欠損/増幅を確認し、変異遺伝子を絞り込む」という目標をほぼ達成できたため。
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今後の研究の推進方策 |
初年度に絞り込んだいくつかの遺伝子について、以下のごとく患者細胞株を用いた遺伝子機能解析を行う。 1) 樹立したT細胞株に欠損遺伝子を、Tet-onシステムを用い発現調節できるように、導入する。 2) 導入遺伝子をドキシサククリンによりon/offし細胞増殖、アポトーシス誘導、cell cycleの変化などを見る。 3) 該当遺伝子の機能および細胞内シグナル伝達経路が既に詳しく分かっている場合には、導入遺伝子をon/offし、その機能および伝達経路の変化を調べる。 4) 該当遺伝子の機能等が未知な場合には、網羅的遺伝子発現解析により、該当遺伝子に関わるシグナル伝達経路を明らかにし、その機能を推定する。
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