アンチトロンビン-レジスタンスの分子病態解明とその血栓性素因マウスモデル創生解析

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25293129
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 小嶋 哲人 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40161913)
• 研究分担者: 高木 明 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30135371) ; 松下 正 名古屋大学, 医学部附属病院, 教授 (30314008)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: ｱﾝﾁﾄﾛﾝﾋﾞﾝ・ﾚｼﾞｽﾀﾝｽ(ATR) / トロンビン / プロトロンビン異常症 / 遺伝性血栓症 / R593Lﾌﾟﾛﾄﾛﾝﾋﾞﾝ-ﾏｳｽ / 一塩基置換 / トロンボモジュリン / 相同組換え

研究実績の概要

本研究では、最近我々が発見・報告したアンチトロンビン・レジスタンス（ATR）を示すトロンビンを生ずるプロトロンビン異常症（c.1787G>T, p.R596L）の概念に基づき、原因不明の遺伝性血栓症での新規ATR症例の検索とその遺伝子変異同定を行うとともに、組換え変異体を用いた他のプロトロンビン変異のATR惹起性検索による新たなATR候補変異の解析を行う。さらに、R593L変異（ヒト分子596Rはマウス分子593Rに相当）プロトロンビンノックイン-マウス（R593Lプロトロンビン-マウス）を作製してin vivo でのATR病態解析を行い、ATRの血栓性分子病態の解明を目的とする。昨年、迅速ATR検出スクリーニング法を用いてATR新規症例検索とその遺伝子変異同定解析を行い、やはり原因不明であった日本人静脈血栓症家系でのATRを２家系で検出（いずれもセルビア型変異[c.1787G>A, p.R596Q]を同定）したが、うち最初の症例を日本初のセルビア型変異症例として今年度に論文報告した（Kishimoto et al.: Ann Hematol. 2015）。また、596Rの一塩基置換により生ずるミスセンス変異体では、TAT形成能が悪くATRを示すと同時にトロンボモジュリンによるフィブリン凝固抑制にも抵抗性を示すことが明らかとなった（投稿中）。さらに、R593Lプロトロンビン-マウス用のターゲティングベクターを作製し、ES細胞での相同組換えにて得られたキメラマウス作製とC58BL6マウスを交配してヘテロマウスを得て、その交配により目的のLoxP配列のみ含むR593Lヘテロマウスの樹立に成功し、ヘテロマウス同士の交配を行ったところ14匹/40匹の仔マウスが生後間もなく死亡し、ホモマウスが胎生致死になることが予想されるが、生存仔マウス26匹のgenotypeを解析中である。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [国際共同研究] University of Belgrade/Blood Transfusion Institute of Serbia/Clinical Center of Serbia(Serbia)
  • 国名: セルビア
  • 外国機関名: University of Belgrade/Blood Transfusion Institute of Serbia/Clinical Center of Serbia
  • 他の機関数: 1
• [雑誌論文] Serum syndecan-4 as a possible biomarker in patients with acute pneumonia. (2016)
  • 著者名/発表者名: Nikaido T, Tanino Y, Wang X, Sato S, Misa K, Fukuhara N, Sato Y, Fukuhara A, Uematsu M, Suzuki Y, Kojima T, Tanino M, Endo Y, Tsuchiya K, Kawamura I, Frevert C, Munakata M
  • 雑誌名: J Infect Dis. 巻: 212 ページ: 1500-1508
  • DOI: 10.1093/infdis/jiv234
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] The first case of antithrombin-resistant prothrombin Belgrade mutation in Japanese. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kishimoto M, Suzuki N, Murata M, Ogawa M, Kanematsu T, Takagi A, Kiyoi H, Kojima T, Matsushita T
  • 雑誌名: Ann Hematol. 巻: 95 ページ: 541-542
  • DOI: 10.1007/s00277-015-2533-6
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] SVA retrotransposition in exon 6 of the coagulation factor IX gene causing severe hemophilia B. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakamura Y, Murata M, Takagi Y, Kozuka T, Nakata Y, Hasebe R, Takagi A, Kitazawa JI, Shima M, Kojima T
  • 雑誌名: Int J Hematol. 巻: 102 ページ: 134-139
  • DOI: 10.1002/jcb.25173
  • 査読あり / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Increased SPHK2 transcription of human colon cancer cells in serum-depleted culture: the involvement of CREB transcription factor. (2015)
  • 著者名/発表者名: Mizutani N, Omori Y, Tanaka K, Ito H, Takagi A, Kojima T, Nakatochi M, Ogiso H, Kawamoto Y, Nakamura M, Suzuki M, Kyogashima M, Tamiya-Koizumi K, Nozawa Y, Murate T
  • 雑誌名: J Cell Biochem. 巻: 116 ページ: 2227-2238
  • DOI: 10.1002/jcb.25173
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Increased Acid Ceramidase Expression depends on Upregulation of Androgen-dependent Deubiquitinases, USP2, in a Human Prostate Cancer Cell Line, LNCaP. (2015)
  • 著者名/発表者名: Mizutani N, Inoue M, Omori Y, Ito H, Tamiya-Koizumi K, Takagi A, Kojima T, Nakamura M, Iwaki S, Nakatochi M, Suzuki M, Nozawa Y, Murate T
  • 雑誌名: J Biochem. 巻: 158 ページ: 309-319
  • DOI: 10.1093/jb/mvv039
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Syndecan 4 mediates Nrf2-dependent expansion of bronchiolar progenitors that protect against lung inflammation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Santoso A, Kikuchi T, Tode N, Hirano T, Komatsu R, Damayanti T, Motohashi H, Yamamoto M, Kojima T, Uede T, Nukiwa T, Ichinose M
  • 雑誌名: Mol Ther. 巻: 24 ページ: 41-52
  • DOI: 10.1038/mt.2015.153
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] アンチトロンビンレジスタンス ―新しい遺伝性血栓性素因― (2015)
  • 著者名/発表者名: 小嶋 哲人, 高木 明, 村田 萌, 高木 夕希
  • 雑誌名: 臨床血液 巻: 56 ページ: 632-638
  • DOI: http://doi.org/10.11406/rinketsu.56.632
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] Practical laboratory assay to detect abnormal prothrombin conveying thrombomodulin resistance. (2015)
  • 著者名/発表者名: 高木夕希、水谷直貴、村田萌、小塚敏弘、中田悠紀子、長谷部瞭、河村奈美、槇山愛弓、橋本恵梨華、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第77回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 金沢
  • 年月日: 2015-10-16 – 2015-10-18
• [学会発表] Investigation of molecular mechanisms of PS mRNA up-regulation by progestin isoforms in HepG2 cells. (2015)
  • 著者名/発表者名: 小塚敏弘、長谷部瞭、中田悠紀子、槇山愛弓、河村奈美、中村友紀、高木夕希、村田萌、水谷直貴、高木明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第77回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 金沢
  • 年月日: 2015-10-16 – 2015-10-18
• [学会発表] アンチトロンビン抵抗性検出検査法の自動凝固検査機器への最適化 Part 2 (2015)
  • 著者名/発表者名: 村田 萌、水谷直貴、高木夕希、長谷部瞭、小塚敏弘、中田悠紀子、高木 明、松下 正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第16回日本検査血液検査血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-07-11 – 2015-07-12
• [学会発表] 深部静脈血栓症で発症したアンチトロンビンレジスタンス症例の抗凝固療法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 岸本磨由子、鈴木伸明、村田 萌、小川実加、兼松 毅、高木 明、小嶋哲人、松下 正
  • 学会等名: 第16回日本検査血液検査血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-07-11 – 2015-07-12
• [学会発表] 先天性アンチトロンビン欠乏症８症例SERPINC1遺伝子解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 中田悠紀子、小塚敏弘、長谷部瞭、高木夕希、村田 萌、上牧 務、松尾真稔、高木 明、松下 正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第16回日本検査血液検査血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-07-11 – 2015-07-12
• [学会発表] Analysis of prothrombin mutants in NA+ binding domain as a potential candidate conveying antithrombin resistance. (2015)
  • 著者名/発表者名: Moe Murata, Naoki Mizutani, Yuki Takagi, Ryo Hasebe, Toshihiro Kozuka, Yukiko Nakata, Akira Takagi, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: XXV Congress of International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Toronto, Canada
  • 年月日: 2015-06-20 – 2015-06-25
  • 国際学会
• [学会発表] Analysis of prothrombin missense mutants at 596ARG by single nucleotide substitution for anticoagulant system. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yuki Takagi, Moe Murata, Yuki Nakamura, Toshihiro Kozuka, Yukiko Nakata, Ryo Hasebe, Akira Takagi, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: XXV Congress of International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Toronto, Canada
  • 年月日: 2015-06-20 – 2015-06-25
  • 国際学会
• [学会発表] A case of severe hemophilia B associated with a large insertion of SVA RETROTRANSPOSON in the coagulation factor IX gene. (2015)
  • 著者名/発表者名: Naoki Mizutani, Yuki Nakamura, Moe Murata, Yuki Takagi, Ryo Hasebe, Toshihiro Kozuka, Yukiko Nakata, Akira Takagi, Jun-ichi Kitazawa, Midori Shima, Tetsuhito Kojima
  • 学会等名: XXV Congress of International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Toronto, Canada
  • 年月日: 2015-06-20 – 2015-06-25
  • 国際学会
• [学会発表] 新たな血栓性素因：アンチトロンビン･レジスタンス (2015)
  • 著者名/発表者名: 小嶋哲人
  • 学会等名: 第25回日本産婦人科新生児血液学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-06-05 – 2015-06-06
  • 招待講演
• [学会発表] Antidotes to dabigatran and anti-Xa anticoagulants (2015)
  • 著者名/発表者名: 小嶋哲人
  • 学会等名: 第37回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 甲府
  • 年月日: 2015-05-21 – 2015-05-23
  • 招待講演
• [学会発表] プロトロンビン変異による新たなアンチトロンビン抵抗性変異の候補解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 村田 萌、水谷直貴、高木夕希、長谷部瞭、小塚敏弘、中田悠紀子、槇山愛弓、河村奈美、橋本恵梨華、高木 明、松下 正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第37回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 甲府
  • 年月日: 2015-05-21 – 2015-05-23
• [学会発表] 深部静脈血栓症で発症しアンチトロンビン抵抗性を示した本邦初 Prothrombin Belgrade 変異の一家系 (2015)
  • 著者名/発表者名: 岸本磨由子、鈴木伸明、村田萌、小川実加、兼松毅、高木明、小嶋哲人、松下正
  • 学会等名: 第37回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 甲府
  • 年月日: 2015-05-21 – 2015-05-23
• [学会発表] プロトロンビン Arg596 における一塩基置換ミスセンス変異体のトロンボモジュリン 抵抗性評価 (2015)
  • 著者名/発表者名: 高木夕希、村田 萌、中村友紀、小塚敏弘、中田悠紀子、長谷部瞭、橋本恵梨華、高木 明、小嶋哲人
  • 学会等名: 第37回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 甲府
  • 年月日: 2015-05-21 – 2015-05-23
• [学会発表] 血小板無力症に同定された GPIIb 遺伝子のミスセンス変異とスプライス変異の複合ヘテロ変異解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 橋本恵梨華、村田萌、槇山愛弓、河村奈美、小塚敏弘、中田悠紀子、長谷部瞭、高木夕希、水谷直貴、高木明、國島 伸治、松下正、小嶋哲人
  • 学会等名: 第37回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 甲府
  • 年月日: 2015-05-21 – 2015-05-23
• [図書] 臨床検査法提要（改訂第34版） (2015)
  • 著者名/発表者名: 小嶋哲人、高木明
  • 総ページ数: 1970
  • 出版者: 金原出版株式会社
• [図書] 新・血栓止血血管学 凝固と炎症 (2015)
  • 著者名/発表者名: 小嶋哲人
  • 総ページ数: 189
  • 出版者: 金芳堂
• [図書] 新・血栓止血血管学 抗凝固と線溶 (2015)
  • 著者名/発表者名: 小嶋哲人
  • 総ページ数: 133
  • 出版者: 金芳堂
• [図書] 血液疾患診療ハンドブック・改訂3版 (2015)
  • 著者名/発表者名: 鈴木伸明、小嶋哲人
  • 総ページ数: 591
  • 出版者: 医薬ジャーナル社
• [図書] Annual Review 2016血液 (2015)
  • 著者名/発表者名: 高木夕希、小嶋哲人
  • 総ページ数: 234
  • 出版者: 中外医学社
• [備考] 名古屋大学大学院医学系研究科医療技術学専攻病態解析学講座分子病態解析学部門血液・遺伝子研究室
  • URL: http://square.umin.ac.jp/bloodlab/Hematol_%26_Gene_Res_Lab/Welcome.html
• [産業財産権] 凝固因子として作用する異常トロンビンのためのトロンビン不活化動態測定方法 (2013)
  • 発明者名: 高木 明、小嶋 哲人、松下 正
  • 権利者名: 国立大学法人名古屋大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特許第5818299号
  • 出願年月日: 2013-04-01
  • 取得年月日: 2015-10-09