| 研究課題/領域番号 |
25293186
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
小川 久雄 熊本大学, 生命科学研究部, 教授 (50177135)
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| 研究分担者 |
泉家 康宏 熊本大学, 生命科学研究部, 助教 (10515414)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 骨格筋 / 分泌因子 / 心不全 / 心保護 |
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| 研究実績の概要 |
プロテオミクス解析による新規骨格筋由来分泌因子の網羅的検索：骨格筋肥大マウス(骨格筋特異的Akt1過剰発現マウス)の骨格筋サンプルを使用しプロテオミクス解析を行い、骨格筋肥大に伴い分泌が亢進するタンパクのスクリーニングを継続して行った。現在のところ昨年度選択した候補遺伝子に加えて、合計９つの候補遺伝子をリストアップしている。培養骨格筋細胞においてアデノウイルスを用いてAkt1を過剰発現し、候補遺伝子の細胞培地中への分泌も確認することができた。候補遺伝子の中のFactor-1に関しては、cre-loxPシステムを用いた骨格筋特異的ノックアウトマウスをすでに作成済みである。現在繁殖を行っており、実験に使用できる個体数が確保でき次第、心筋梗塞モデル、圧負荷心不全モデル、腎疾患モデルなど我々がこれまで報告してきた病態モデルを作成し、Factor-1の生体における役割を解析する予定としている。これらの結果はまだ論文化できていないため、学会での発表も行っていない。
骨格筋由来分泌因子のバイオマーカーとしての可能性検討：上記９つの候補遺伝子のうち、ELISAが市販されているものはすでに心不全患者における血中濃度測定を開始している。また、我々は現在入院患者で簡易サルコペニアインデックスによる心不全患者のリスク評価を行っており、候補遺伝子との相関についても検討を開始している。簡易サルコペニアインデックスによる心不全患者のリスク評価に関しては、現在論文作成中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成２６年度の実施目標としていた分泌タンパクのスクリーニングと機能解析は候補遺伝子を９つリストアップできたことからおおむね順調に進んでいると考えられる。また候補遺伝子のうちの一つは組織特異的ノックアウトマウスの作製も順調に進行しており、本年度はそれらを用いた実験を完成できる見込みである。
臨床検体における検討に関しては、既知の分泌因子は平成２５年度に結果を論文として４報報告した。現在は我々が現在候補としてスクリーニングした９つの新規骨格筋由来分泌と簡易サルコペニアインデックスの相関について検討を進めている。
以上より、本研究はおおむね予定通り進行していると考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
Factor-1の骨格筋特異的ノックアウトマウスに対し、心筋梗塞モデル、圧負荷心不全モデル、腎疾患モデルなどの病態モデルを作成し、Factor-1の生体における役割を解析する予定としている。その他の候補遺伝子も随時ノックアウトマウスの作製を行い、生体における役割を検討する予定である。
バイオマーカーの検討に関しては、現在候補としてスクリーニングした９つの新規骨格筋由来分泌のうち市販のELISAがないものについては、ペプチド抗体を作製しELISAシステムを構築する。抗体作製,ELISAシステムの構築は高度な専門的技術が必要であり迅速に実験計画を遂行するために抗体作製受託サービスを利用する予定である.
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新規分泌因子のスクリーニングと実験の再現性確認に時間を要したため、抗体作成とELISAの構築が平成２７年度にずれ込むこととなった。また残る候補遺伝子の遺伝子改変マウスの作製も平成２７年度に随時進めていく予定となったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
抗体作成とELISAの構築及び遺伝子改変マウスの作製に使用する予定である。
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