自己細胞移植による次世代型血友病A治療の創出

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25293237
• 研究機関: 奈良県立医科大学
• 研究代表者: 嶋 緑倫 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (30162663)
• 研究分担者: 松井 英人 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (00571027) ; 堀田 秋津 京都大学, 学内共同利用施設等, 助教 (50578002)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: hemophilia A / gene therapy / piggyBack / transposon / factor Ⅷ

研究実績の概要

前年度までの研究にて我々は非ウイルス性ベクターであるpiggyBack トランスポゾンベクターを用いて血友病Ａマウスモデルに第FVIII因子遺伝子を導入し３００日にわたって第VIII因子を発現することに成功した（Matsui H, et.al. PLos One 9(8) e104597, 2014）。しかしながら、ヒトへの臨床応用を考える場合、さらに、大きな動物での検討が必須であった。平成２７年度では、ハイドロダイナミック法（hydrodynamic:gene delivery:HGD）を用いて奈良医大で所有する血友病Ａイヌモデルに遺伝子を導入する実験を行った。１０－１２ｋｇの血友病イヌビーグル犬に全身麻酔下に大伏在静脈に１８Ｇの末梢カテーテルを挿入し、ガイドワイアーを用いて注入用のバルーンカテーテルを挿入した。IVR技術によりバルーンカテーテルは肝静脈分岐下に設置した。肝標的HGDはpiggyBack トランスポゾンベクターを用いて右側、右中葉、左中葉左側の、４つの肝葉で実施した。組織損傷の評価のために血液サンプルを採取した。ＧＦＰ発現の評価のためにベクター投与５および１２０日目にエコーガイド下に肝生検を実施した。ＡＳＴおよびＡＬＴの一過性の上昇がみられたが、循環、呼吸、心機能に影響は見られなかった。組織学的検査により、全４肝葉の７０－８０％の肝細胞でGFPが投与５および１２０日とも陽性であった。ＨＧＤおよびＩＶＲを併用することにより大動物モデルにおいても低侵襲的に安全かつ有効に遺伝子を導入することが確認された。次に、血友病Ａイヌモデルを用いて第VIII因子遺伝子をＨＧＤ法およびＩＶＲ法にて導入を試みる。さらに本年度は第VIII因子インヒビターが発生した軽症血友病A患者の抗原構造を明らかにした。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

27年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Mild hemophilia A patient with novel Pro1809Leu mutation develops an anti-C2 antibody inhibiting allogeneic but not autologous factor VIII activity. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yada K, Nogami K, Takeyama M, Ogiwara K, Wakabayashi H, Shima M.
  • 雑誌名: Journal of Thrombosis Haemostasis 巻: 13(10) ページ: 1843-1853
  • DOI: 10.1111/jth.13118
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Phenotypic heterogeneity of hemostasis in severe hemophilia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nogami K, Shima M.
  • 雑誌名: Seminars in Thrombosis and Hemostasis 巻: 41(8) ページ: 826-831
  • DOI: 10.1055/s-0034-1395349
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Novel gene therapy strategy for hemophilia A by hydrodynamic gene delivery combined with non-viral piggyBac transposon vector in canine model (2015)
  • 著者名/発表者名: Noda M, Matsui H, Matsunari Y, Ochi S, Shima M, Fukuoka Y, Sato T, Anai H, Kichikawa K, Nakayama M, Hotta A, Sugimoto M.
  • 学会等名: 2015 Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • 発表場所: Orlando, Florida, USA
  • 年月日: 2015-12-07
  • 国際学会
• [学会発表] Long-term phenotypic correction of hemophilia A mice by non-viral piggyBac transposon vector. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsui H, Noda M, Shima M, Hotta A, Sugimoto M.
  • 学会等名: International Society on Thrombosis and Haemostasis (ISTH) 2015 Congress
  • 発表場所: Toronto, Canada
  • 年月日: 2015-06-24
  • 国際学会
• [学会発表] Double-layered cell sheet transplantation that achieves durable factor VIII delivery in the mouse model of hemophilia A (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsui H, Noda M, Utoh R, Shima M, Okano T, Sugimoto M.
  • 学会等名: The American Society of Gene and Cell Therapy 18th Annual Meeting
  • 発表場所: New Orleans, USA
  • 年月日: 2015-05-13
  • 国際学会
• [図書] 血液疾患 診断・治療指針 (2015)
  • 著者名/発表者名: 嶋 緑倫
  • 総ページ数: 576(474-482)
  • 出版者: 中山書店
• [図書] 小児血液・腫瘍学 (2015)
  • 著者名/発表者名: 嶋 緑倫
  • 総ページ数: 608(443-448)
  • 出版者: 診断と治療社