| 研究課題/領域番号 |
25293357
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| 研究機関 | 独立行政法人理化学研究所 |
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研究代表者 |
杉田 直 独立行政法人理化学研究所, 多細胞システム形成研究センター, 副プロジェクトリーダー (10299456)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | iPS細胞 / 網膜色素上皮細胞 / MHC抗原 / 炎症細胞 / サイトカイン |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、昨年度に引き続きヒトiPS細胞由来網膜色素上皮細胞 (RPE) を分化・誘導した。そのiPS細胞由来RPEのT細胞、B細胞、樹状細胞、単球、NK細胞ら免疫炎症細胞の免疫調節作用を解析した。ヒトiPS細胞由来RPEのこれらの細胞抑制試験、サイトカイン産生能を検討したところいずれの細胞に対しても強い抑制を示した。T細胞に関してはRPEの産生するTGFbを介して抑制を行っていた。また、iPS-RPEのMHC-class I、class II、および副刺激分子の発現変化をflow cytometryで検討したところMHC-class Iの構成的な発現、class IIの無発現、副刺激分子はB7-H1、B7-H3の発現が見られていた。MHC-class IIはIFN-gamma存在下で発現が見られていた。次に我々は、ヒトのiPS-RPE分化誘導方法に類似して、カニクイザルのiPS細胞からRPEを樹立した（MHCホモライン）。RPEのMHC発現はflow cytometry及び遺伝子多型アリル解析で確認した。また、サルiPS-RPEを他家移植（MHC一致 vs不一致）で網膜下に移植して、術後1、2、4、8週、3ヶ月、6ヶ月で眼底写真、蛍光眼底撮影（FA）、網膜断層検査（OCT）で拒絶の有無を評価した。その結果、サルiPS細胞から分化誘導したRPEは、RPE特異的マーカーを発現、また、視細胞外節貪食能を示した。このRPEはMHC class Iの構成的な発現、また、IFN-gamma存在下でのMHC class IIの発現が見られた。サルのin vivo他家移植モデルでは、MHC不一致の組み合わせではFAでのリーク、OCTでの黄斑浮腫、網膜剥離、網膜の非薄化など拒絶を示唆する所見が見られた。一方、MHCアリルサル（MHC一致）への移植では炎症の所見はなく網膜はintactであった。これらの結果、サルのRPE他家移植モデルでは、免疫系の細胞がMHCの型が合わないRPEを認識、逆に、合うRPEを認識しない可能性が示唆された。以上より、iPSバンクのHLAホモRPEラインを他家移植で使用できる可能性があると思われた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
サルの他家移植動物in vivoモデルで、MHCホモのiPS細胞からRPEの分化誘導に成功して、それらを移植で用いてRPEの発現するMHC抗原の重要性を確認できた事。
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| 今後の研究の推進方策 |
サルの他家移植動物モデルに加えて、ヒトRPEとヒト末梢血単核球やT細胞でin vitroでMHC拘束性に反応するか確認予定（ヒト他家拒絶反応in vitroモデル）
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