小児肝がん国際共同臨床試験に向けた新たな治療戦略のための分子基盤の構築

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 25293359
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 小倉 薫 広島大学, 大学病院, 講師 (10346653)
• 研究分担者: 檜山 英三 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 教授 (00218744) ; 上田 祐華 広島大学, 大学病院, 医科診療医 (70624641) ; 鬼武 美幸 広島大学, 大学病院, 病院助教 (10448269)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 小児 / 癌 / トランレーショナルリサーチ / 薬剤反応性 / ゲノム

研究概要

JPLT-2及び当科で、全国統一の治療プロトコール(JPLT-1 及び-2)で治療され、予後が判明し、さらに腫瘍が保存されている約200例の腫瘍や核酸をと、肝芽腫細胞株としてHepG2 とJPLTで樹立したJPHB-1,2,3を用いた。
腫瘍および正常ＤＮＡをマイクロアレイを用いて、全染色体上にある約100万個のＳＮＰｓのシグナルを検出したところ、1p、1q、2q、4,　6,　11,13,17,19番染色体に欠失あるいは増加が認められた。また、網羅的遺伝子発現検索：網羅的遺伝子発現を既存全ゲノム型のアレイにて検索し、ゲノム異常のある部位や、予後不良例（肝内再発例、遠隔転移例）で有意に発現が変動している遺伝子を12個抽出し、既存の蛍光リアルタイムＰＣＲ法で検証し、3つ遺伝子で有意さを認めた。さらに、β―カテニン異常およびテロメラーゼ高活性やＴＥＲＴ高発現腫瘍でのパスウェイ検討から、Wntシグナルのみならず、MAPKの関与が示された。次世代シークエンス解析にて変異や欠失を検索したところ、共通欠失部位が14か所見出されたが一部に多型が存在していた。臨床病理分類との関連からは特に有意な関連は見出されていなかったが、高分化型ではWnt シグナル以外の遺伝子変異がほとんど見出せなかった。画像所見と手術所見からの分類で、標準リスク群、中間リスク・高リスク群として解析したところ、高リスク群である遠隔転移例で有意に変異が見出された部位が2か所に認められた。この部位の遺伝子を同定し、そのsiRNAを作成した。そのsiRNAを細胞株（HepG２、並びにJPHB１，２，３）に導入し、その効果を判定したところ、HepGe2とJPHB3で濃度依存性に増殖が抑制され、細胞増殖にかかわる遺伝子候補であると考えられた。一方、中間リスク群で、多発例、あるいはPRETEXTIVである症例に有意な変異は見出されず、さらなる症例を追加して検討している。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

小児肝腫瘍のうち、予定していた臨床検体約200検体と細胞株の解析を３年間で行う研究であり、初年度は予後調査の終了している臨床検体を中心に解析した。予定していたメチル化解析と動物実験としてのアニマルテスティングが達成できていないが、その他の細胞を用いたセルテスティングまでは至っており、肝芽腫の悪性度を規定している分子標的遺伝子候補が見いだされてきており、本年度の達成目標はほぼ達成できたと考えている。

今後の研究の推進方策

平成25年度に解析した結果に加えて、細胞株を検討してさらに患児の両親のＤＮＡ30組についても検討する。網羅的遺伝子変化の検索とともに、ホモとなっている部位での欠失領域とともに欠失アレルの由来の検討。遺伝子発現からインプリンティング遺伝子の同定。Wntシグナル異常、テロメラーゼとネットワーク解析とともに、次世代シーケンサーでの遺伝子変異、欠失、さらにmiRNA発現解析を行い、リスクに寄与する因子の同定を確定し、セルテスティング、アニマルテスティングを通じて、目的とする分子標的を明らかにする方針である。

研究成果

• [雑誌論文] Hepatoblastoma state of the art: pathology, genetics, risk stratification, and chemotherapy (2014)
  • 著者名/発表者名: Czauderna P, Lopez-Terrada D, Hiyama E, Haberle B, Malogolowkin MH, Meyers RL
  • 雑誌名: Current Opinion in Pediatrics 巻: 26 ページ: 19-28
  • DOI: 10.1097/MOP. 0000000000000046
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Towards an international pediatric liver tumor consensus classification: proceedings of the Los Angeles COG liver tumors symposium (2014)
  • 著者名/発表者名: Lopez-Terrada D, Alaggio R, de Davila MT, Czauderna P, Hiyama E, Katzenstein H, Leuschner I, Malogolowkin M, Meyers R, Ranganathan S, Tanaka Y, Tomlinson G, Fabre M, Zimmermann A, Finegold MJ; Children's Oncology Group Liver Tumor Committee
  • 雑誌名: Modern Pathology 巻: 27 ページ: 472-491
  • DOI: 10.1038/modpathol.2013.80
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] RASSF1A methylation indicates a poor prognosis in hepatoblastoma patients (2013)
  • 著者名/発表者名: Honda S, Miyagi H, Suzuki H, Minato M, Haruta M, Kaneko Y, Hatanaka KC, Hiyama E, Kamijo T, Okada T, Taketomi A
  • 雑誌名: Pediatric Surgery International 巻: 29 ページ: 1147-1152
  • DOI: 10.1007/s00383-013-3371-z
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of MYCN amplification using blood plasma: noninvasive therapy evaluation and prediction of prognosis in neuroblastoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Kojima M, Hiyama E, Fukuba I, Yamaoka E, Ueda Y, Onitake Y, Kurihara S, Sueda T
  • 雑誌名: Pediatric Surgery International 巻: 29 ページ: 1139-1145
  • DOI: 10.1007/s00383-013-3374-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] A cisplatin plus pirarubicin-based JPLT2 chemotherapy for hepatoblastoma: experience and future of the Japanese Study Group for Pediatric Liver Tumor (JPLT) (2013)
  • 著者名/発表者名: Hiyama E, Ueda Y, Onitake Y, Kurihara S, Watanabe K, Hishiki T, Tajiri T, Ida K, Yano M, Kondo S, Oue T; Japanese Study Group for Pediatric Liver Tumor
  • 雑誌名: Pediatric Surgery International 巻: 29 ページ: 1071-1075
  • DOI: 10.1007/s00383-013-3399-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Current therapeutic strategies for childhood hepatic malignant tumors (2013)
  • 著者名/発表者名: Hiyama E
  • 雑誌名: International Journal of Clinical Oncology 巻: 18 ページ: 943-945
  • DOI: 10.1007/s10147-013-0607-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization of common marmoset (Callithrix jacchus) bone marrow-derived mesenchymal stem cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanda A, Sotomaru Y, Nobukiyo A, Yamaoka E, Hiyama E
  • 雑誌名: Folia Histochemica et Cytobiologica 巻: 51 ページ: 292-299
  • DOI: 10.5603/FHC.2013.0040
  • 査読あり
• [学会発表] 小児肝腫瘍に対する診断と治療 (2014)
  • 著者名/発表者名: 檜山 英三
  • 学会等名: 第39回北海道小児がん研究会
  • 発表場所: 京王プラザ（北海道札幌市）
  • 年月日: 20140228-20140228
  • 招待講演
• [学会発表] 希少小児がんである肝芽腫に対する薬剤開発戦略としての国際共同臨床試験に関する研究 (2014)
  • 著者名/発表者名: 檜山 英三
  • 学会等名: 平成25年度厚生労働科学研究がん臨床研究成果発表会（研究者向け）
  • 発表場所: 国際研究交流会館国際会議場（東京都中央区）
  • 年月日: 20140204-20140205
• [学会発表] 高用量シスプラチン療法後に腫瘍全摘を行った門脈浸潤を伴う肝芽腫の一例 (2013)
  • 著者名/発表者名: 江藤 昌平, 古江 綾, 千々松 郁枝, 三木 瑞香, 世羅 康彦, 川口 浩史, 中村 和洋, 上田 祐華, 鬼武 美幸, 小倉 薫, 檜山 英三, 小林 正夫
  • 学会等名: 第55回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: ヒルトン福岡シーホーク（福岡県福岡市）
  • 年月日: 20131129-20131201
• [学会発表] 次世代シーケンサーを用いた肝芽腫のメチル化解析による予後予測マーカー確立の試み (2013)
  • 著者名/発表者名: 本多 昌平, 岡田 忠雄, 湊 雅嗣, 春田 雅之, 金子 安比古, 檜山 英三, 武冨 紹信
  • 学会等名: 第55回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: ヒルトン福岡シーホーク（福岡県福岡市）
  • 年月日: 20131129-20131201
• [学会発表] Wilms腫瘍を合併した縦隔奇形腫の１例 (2013)
  • 著者名/発表者名: 小倉 薫, 檜山 英三, 鬼武 美幸, 上田 祐華, 千々松 郁枝, 世羅 康彦, 小林 正夫
  • 学会等名: 第55回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: ヒルトン福岡シーホーク（福岡県福岡市）
  • 年月日: 20131129-20131201
• [学会発表] 肺転移巣手術のタイミングに苦慮した高リスク肝芽腫の一例 (2013)
  • 著者名/発表者名: 栗原 将, 鬼武 美幸, 小倉 薫, 上田 祐華, 檜山 英三, 世羅 康彦, 三木 瑞香, 中村 和洋, 小林 正夫
  • 学会等名: 第2回せとうち小児がんセミナー
  • 発表場所: ホテルグランヴィア岡山（岡山県岡山市）
  • 年月日: 20131005-20131005
• [学会発表] Epigenetic analyses to establish a molecular-genetic marker for treatment outcome in hepatoblastomas (2013)
  • 著者名/発表者名: Honda S, Okada T, Suzuki H, Minato M, Haruta M, Kaneko Y, Hiyama E, Taketomi A
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術集会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] CHILDREN'S HEPATIC TUMOR INTERNATIONAL COLLABORATION (CHIC): NEW HEPATOBLASTOMA INTERNATIONAL RISK GROUPS (HB-IRG) (2013)
  • 著者名/発表者名: Meyers R, Haberle B, Hiyama E, Maibach R, Krailo M, Feng Y, Yoshimura K, Rinaldi E, Ortali M, Saraceno D, Rangaswami A, Malogolowkin M, Perilongo G, Watanabe K, Schmid I, Aronson D, Von Schweinitz D, Leuschner I, Lopez-Terrada D, Tanaka Y, Czauderna P
  • 学会等名: 45th Congress of the International Society of Pediatric Oncology
  • 発表場所: Hong Kong Convention and Exhibition Centre(中国 香港）
  • 年月日: 20130925-20130928
• [学会発表] FURTHER STUDY: IDENTIFICATION OF NEW CANDIDATE GENES IN PROGRESSION OF HEPATOBLASTOMA USING GENOME-WIDE ASSOCIATION STUDY (2013)
  • 著者名/発表者名: Hiyama E, Ueda Y, Onitake Y, Ida K, Ogura K, Kondo S, Kamijyo T, Watanabe K, Oue T, Hishiki T, Tajiri T, Horie H, Inoue T, Tanaka Y.
  • 学会等名: 45th Congress of the International Society of Pediatric Oncology
  • 発表場所: Hong Kong Convention and Exhibition Centre(中国 香港）
  • 年月日: 20130925-20130928
• [学会発表] Survival, surgical respectability, and late effects in the hepatoblastoma patients treated by cisplatin plus pirarubicin(CITA) chemotherapy. (Abstract 10038) (2013)
  • 著者名/発表者名: Hiyama E, Kamimatsuse A, Onitake Y, Ueda Y, Watanabe K, Hishiki T, Tajiri T, Ida K, Yano M, Kondo S, Oue T.
  • 学会等名: ASCO Annual ’ 13 Meeting
  • 発表場所: McComick Place（アメリカ シカゴ）
  • 年月日: 20130531-20130604
• [学会発表] 網羅的メチル化解析による肝芽腫の分化度からみた予後予測マーカーを確立する取組み (2013)
  • 著者名/発表者名: 本多 昌平, 岡田 忠雄，宮城 久之，檜山 英三, 武冨 紹信
  • 学会等名: 第50回日本小児外科学会学術集会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都新宿区）
  • 年月日: 20130530-20130601
• [学会発表] 血中DNA を用いた神経芽腫の分子診断：予後予測と治療効果判定 (2013)
  • 著者名/発表者名: 檜山 英三，児島 正人，河島 茉澄，上田 祐華，鬼武 美幸，上松瀬 新，小倉 薫，末田 泰二郎
  • 学会等名: 第50回日本小児外科学会学術集会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都新宿区）
  • 年月日: 20130530-20130601
• [学会発表] 18 トリソミーに合併した肝芽腫の1 例―染色体異常を合併したJPLT 登録症例の検討を併せて― (2013)
  • 著者名/発表者名: 鬼武 美幸，檜山 英三，小倉 薫，上松瀬 新, 中村 和洋，古江 綾
  • 学会等名: 第50回日本小児外科学会学術集会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都新宿区）
  • 年月日: 20130530-20130601
• [学会発表] 術後に心不全の改善を認めた静脈管開存症の1 例 (2013)
  • 著者名/発表者名: 小倉 薫，檜山 英三，上松瀬 新，鬼武 美幸，上田 祐華
  • 学会等名: 第50回日本小児外科学会学術集会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都新宿区）
  • 年月日: 20130530-20130601
• [学会発表] 小児がん (2013)
  • 著者名/発表者名: 檜山 英三
  • 学会等名: がん政策サミット2013春～県計画の好事例を共有し実践していこう～
  • 発表場所: ベルサール九段（東京都千代田区）
  • 年月日: 20130517-20130519
  • 招待講演
• [学会発表] 2度の再発を来した脂肪芽腫の1例 (2013)
  • 著者名/発表者名: 小倉 薫, 檜山 英三, 鬼武 美幸, 上田 祐華, 谷 守通
  • 学会等名: 第54回中国四国小児がん研究会
  • 発表場所: 岩国医療センター（山口県岩国市）
  • 年月日: 20130511-20130511
• [学会発表] Wnt Signaling and telomerase activation in hepatoblastoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Hiyama E, Ueda Y, Kamimatsuse A, Onitake Y, Ogura K, Hiyama K
  • 学会等名: AACR Annual Meeintg2013
  • 発表場所: Walter E. Washington Convention Center（アメリカ ワシントン）
  • 年月日: 20130406-20130410