| 研究概要 |
CL/P患者３名の乳歯歯髄より乳歯歯髄より幹細胞(CL/P-SC)を単離に成功した。CL/P-SCの幹細胞学的特徴を解析するため、３名の正常患者より乳歯幹細胞(Cont-SC)も単離した。両者の幹細胞学的特徴を解析すると、コロニー形成能、細胞増殖能、幹細胞マーカーの発現ならびに多分化能のいずれもCL/P-SCが劣っていた。
次に、培養CL/P-SCならびにCont-SCより全蛋白質および全RNAを抽出し、ウェスタンブロティング法およびRT-PCR法を用いてTGF-βシグナル(TGFBRI, TGFBRII, TGFBRIII, Smad2/3, phospho-Smad2/3, p38, phospho-p38, ERK, phospho-ERK, Akt, phospho-Akt)の異常を蛋白質レベルおよび遺伝子レベルで検索した。TGFBRIおよびTGFBRIIIはCL/P-SCならびにCont-SCで遺伝子・タンパク質レベルで同等の発現強度を示したが、TGFBRIIはCont-SCに比べてCL/P-SCにおいて有意に低下していた。しかしながら、DNAシークエンス法によりCL/P-SCにおけるTGFBRII遺伝子の変異等の異常は認められなかった。
さらに下流シグナルをウェスタンブロティング法にて解析したところ、Smad2/3, phospho-Smad2/3, p38, phospho-p38, Akt, phospho-Aktのいずれも両者の間に発現強度に変化が認められなかった。一方、ERKのレベルは同等であったが、phospho-ERKのレベルがCL/P-SCで有意に上昇していた。
以上の結果から、CL/P-SCはCont-SCと比較して幹細胞生物学的に障害を受けている事が示唆された。
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