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分裂酵母ヒストン転写因子Ams2のZinc finger変異型は、タンパク質分解抵抗性とCENP-A機能阻害というユニークな特徴を示すことを見出した。本年度は、Ams2のホモ複合体の物理的相互作用について解析を行った。
Zinc finger変異型と正常型Ams2タンパク質どうしの相互作用 Yeast two hybrid解析で得られた両者間の相互作用が、物理的相互作用によるものかどうかを確認するため、共免疫沈降解析を行った。正常型Ams2の免疫沈降によりZinc finger変異型タンパク質は共沈降したが、N末領域欠失型では共沈降は見られなかった。これにより、Ams2はN末領域どうしでホモ複合体を形成していることがわかった。
補助事業期間全体を通して、Zinc finger変異型タンパク質の分解抵抗性は、正常型Ams2で見られるリン酸化が起こらないことが原因であることが明らかとなった。また、Zinc finger変異型タンパク質はヒストンプロモーター結合しないことから、Zinc fingerはDNA結合ドメインとして機能していることがわかった。さらに、Ams2のN末端領域でホモ複合体を形成することが共免疫沈降解析により明らかとなった。このN末端領域が存在するZinc finger変異型タンパク質を野生株で強制発現させると、コアヒストン転写量の低下を引き起こすことを見出した。このヒストン転写量の低下が、CENP-A機能阻害を引き起す原因であった。これらの結果より、Ams2タンパク質はN末端どうしで複合体形成し、Zinc finger motifを介してコアヒストンプロモーターに結合することで、コアヒストン転写を活性化していると考えられる。このような複合体形成を介することで、両方向性のヒストン遺伝子の転写活性化を引き起こしている可能性が示された。
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