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糖タンパク質の品質管理で中心的な役割を果たすことで知られる、レクチン様分子シャペロンの活性を、その場で、かつ簡易的な手段で評価する手法の開発を目的とする。糖鎖修飾を受けるタンパク質は、小胞体内における糖タンパク質品質管理機構によりフォールディングの補助、検査を受ける。品質管理機構は、数種類の糖転移酵素、糖切断酵素、さらに分子シャペロンであるカルネキシン、カルレティキュリンから構成される。これらの酵素のほとんどはレクチン活性を有しており、適した糖鎖構造の基質と反応する。本研究では、環境応答性蛍光基をコンジュゲートした新規糖鎖プローブの開発を行う。分子シャペロンと結合することで蛍光発光を生じるよう
に糖鎖プローブを設計することで、分子シャペロン活性の可視化を実現し、また、発光強度の比較から解離定数の導出が容易に行うことができると期待される。前年度に調製した糖鎖プローブが分子シャペロンの基質として働くことを確認するために、蛍光分光器を用いて、分子シャペロン存在下での糖鎖プローブの蛍光変化を測定する。最終年度は分子シャペロンと合成プローブの相互作用実験を行う。昨年度合成したNileRedコンジュゲート糖鎖との相互作用実験位用いるシャペロンとしてカルレティキュリンを採用した。大腸菌からのカルレティキュリン発現系を構築した。その結果カルレティキュリンの大量調製が可能になった。次に、合成糖鎖の蛍光基の蛍光特性を蛍光スペクトル測定で評価した。今後、調製したこれらの化合物を用いて詳細な相互作用実験を行っていく予定である。
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