| 研究課題/領域番号 |
25430092
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
吉信 公美子 熊本大学, 生命資源研究・支援センター, 助教 (20274730)
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| 研究分担者 |
荒木 正健 熊本大学, 生命資源研究・支援センター, 准教授 (80271609)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 遺伝子発現 / 性差 / 遺伝子改変マウス / 可変型遺伝子トラップ / X-gal染色 |
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| 研究実績の概要 |
我々は、個体レベルでの遺伝子機能の解明を目指し、可変型遺伝子トラップ法により多くの遺伝子改変マウスを作製してきた。可変型遺伝子トラップマウスの解析を進める中、発現に性差を示すラインを見出した。本研究テーマでは、可変型遺伝子トラップマウスを利用して新たな性差発現を示す遺伝子の機能解析を行い、性差の背景を明らかにすることを目指している。
1.遺伝子トラップラインのX-gal染色解析から性差を認めた遺伝子の候補は、Tcf12, Ube3, Elovl6,β4galt5, Rail4, Smyd2, 6720401G13Rik,CJ142626の８遺伝子である。H26年度は、転写レベルの性差が見られるのか、これらの遺伝子発現をRT-PCRで解析した。しかし、転写レベルではX-gal染色の結果のような明らかな性差を確認することができなかった。
2.Ayu21-W498ラインでヘテロ同士の交配を行い、得られたホモ接合体からRNAを抽出し、RT-PCRによりnullになっていることを確認した。遺伝子トラップではベクター挿入位置によりnullにならない場合があるが、Ayu21-W498ラインではnull確認でき、Smyd2欠損ラインであることを確認した。
3.使用している遺伝子トラップマウスは、C57BL/6系統とCBA系統のF1であるTT2 ES細胞から樹立された雑種である。近交化のためSmyd2遺伝子トラップラインをC57BL/6に戻し交配しており、N6世代を得た時点で再度X-gal染色を行った。しかしながら、N6世代ではX-gal染色に性差が見られなかった。発現にはマウス系統間および性別の差が見られることが知られており、系統間の違いによる影響が考えられた。そのため、N6にCBA系統を交配し、CBAへの戻し交配を開始した。また、X-gal染色において脂肪で顕著な違いを示したElovl6遺伝子トラップラインも個体レベルでの発現解析を進めるため、凍結胚を起こした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初の計画に加え、系統間の差も考慮し、CBA系統への戻し交配も行うことにした。そのため、発現解析や表現型解析はあまり進めることができなかったが、今回見出した性差発現には、予想以上に複雑なメカニズムが存在することが考えられた。
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| 今後の研究の推進方策 |
H26年度に引き続きSmyd2遺伝子とElovl6遺伝子のリアルタイムPCR、in situ hybridization、組織免疫染色を実施し、内在性の発現パターンを解析する。Smyd2遺伝子トラップライン（Ayu21-W498）の表現型解析のためヘテロ同士の交配を行い、ホモ接合体で組織解析、心エコー、生化学検査により、野生型やヘテロ接合体と比べてホモ接合体において変化が見られるか解析する。Smyd2解析対象としてSmyd2遺伝子トラップマウスにElovl6遺伝子トラップマウスも加えるので解析個体数は増加するが、技術補佐員の協力を得て計画を進める。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
H26年度に計画していたリアルタイムPCR、in situ hybridization、組織免疫染色が全て終了せず、H27年度に持ち越したため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
リアルタイムPCR、in situ hybridization、組織免疫染色に必要な試薬や交代、ディスポ製品の購入および心エコー、生化学検査のための検査費として使用する。また、戻し交配に必要な野生型マウスの購入および遺伝子トラップマウスの飼育費として使用する。
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