| 研究課題/領域番号 |
25430153
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
伊地知 暢広 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 助教 (80380624)
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| 研究分担者 |
小戝 健一郎 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 教授 (90258418)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | がん遺伝子治療 |
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| 研究実績の概要 |
がん幹細胞（CSCs:Cancer Stem Cells）は、がん組織内において高い腫瘍形成・転移能を有し、抗がん剤や放射線治療などに対する高い抵抗性を示す少数の細胞集団であり、がんの難治性や再発と密接に関係しているとの考えが実証されつつある。本研究は、独自開発したウイルスベクター技術により、がん幹細胞の標的・同定と革新的ながん治療技術開発を目的としている。
平成27年度は主に以下の研究を行った。
１）独自開発した、特異的プロモーターによる選択的な遺伝子発現制御下に蛍光タンパク質を発現するウイルスベクターシステムを応用して、がん幹細胞特異的内因性分子マーカー（プロモーター）の探索を検討した。CD133陽性のがん幹細胞集団を含むヒトグリオブラストーマ由来がん細胞株X01GBSを対象とし、上記ウイスル感染細胞を蛍光タンパク質及びCD133表面マーカーの発現を指標にしてセルソーティングを行い、得られた各分画のがん幹細胞としての性質をSphereアッセイにより評価した。その結果、CD133陽性分画が陰性分画と比較しSphere形成率が高かったことから、本システムを用いたがん幹細胞同定の検討が可能であることが示唆された。
２）上記ウイルスベクターシステムに2つの新規がん幹細胞特異的プロモーター候補をそれぞれ導入し、がん幹細胞の標的・同定が可能であるか検証するため、まずそれぞれのウイスルを感染し、蛍光タンパク質を安定的に発現する安定発現株を樹立した。現在、これら安定発現株を対象に、FACS解析及びSphereアッセイを行い、各プロモーターとがん幹細胞様性質との関連について検討を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
今年度は、特異的プロモーターによる選択的な遺伝子発現制御下に蛍光タンパク質を発現するウイルスベクターシステムを応用した、がん幹細胞特異的プロモーター探索システムを構築した。これにより、2種のがん幹細胞特異的プロモーター候補の、がん幹細胞との関連について検討を行う基盤を構築できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成28年度は以下の2点について研究を行う。
１）2種のがん幹細胞特異的プロモーター候補の制御下に蛍光タンパク質を発現するウイルスベクターを感染し、得られた安定発現株を対象に、蛍光タンパク質及びCD133表面マーカーの発現を指標にしてセルソーティングを行い、各分画の細胞を単離する。
２）得られた各分画について、Sphereアッセイを行い、各プロモーター候補とがん幹細胞様性質との関連について検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究の進展に伴い、新たながん幹細胞特異的プロモーター候補の機能検証の為、異なるベクター系の利用も検討する必要が生じた。これらの検討を含めたより詳細な解析を行う為、研究計画の変更が必要となった。構築した異なるベクター系での機能検証に関わる消耗品等の購入額が次年度使用額として生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成28年度は、新しく構築した異なるベクター系を利用した、新たながん幹細胞特異的プロモーター候補の機能検証を、次年度使用額を用いて推進する。
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